生物素-親合素系統的生物素與親和層析介紹
親和層析是將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中,當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時,與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附,直接流出,從而與被分離的蛋白質分開,然后選用適當的洗脫液, 改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來。
生物素-親和素系統可以與親和層析的方法結合,大大提高純化蛋白質的純度,或者為已知配體尋找受體。步驟是首先將生物素共價結合到配體蛋白上,再將生物素化后的配體蛋白加入含有受體蛋白的混合物,然后將此混合物通過預先固定了親和素的層析柱,這時配體受體復合物就通過生物素-親和素系統停留在層析柱上,最后通過選擇性洗脫獲得此受體配體蛋白復合物或者僅有受體。這一方法被廣泛運用于藥物研發行業,當人們發現某種藥物分子具有療效但是又不清楚它具體作用于哪種蛋白質時,可以將其生物素化然后把靶蛋白從成千上萬種蛋白質中“抓”出來。
生物素-親和素系統還可以用相似的方法分離DNA.方法是在DNA探針的一端掛上生物素,然后用其獲得目的DNA片段,再利用固定化的親和素回收這些DNA。
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