生物素-鏈霉親和素結合系統及衍生品的實際應用(一)
? ? ? ?生物素-鏈霉親和素結合系統的廣泛采用主要是由于兩個因素。第一個是生物素和鏈霉親和素分子本身相對較小,它可以與生物活性大分子(例如抗體)廣泛結合,而不會對其功能(即抗體的結合位點)產生抗性。第二個是生物素和鏈霉親和素彼此結合的特異性,以及后續鍵的強度,可實現強大的流線型生物測定應用。鏈霉親和素四聚體對生物素具有極高的結合親和力,解離常數(K d)約為10 -14摩爾/升。這種緊密而特異性的結合是快速的,并且能夠承受pH,溫度,有機溶劑和變性劑的極端作用。
?
?
? ? ? ?圖1.鏈霉親和素-生物素相互作用的圖示。鏈霉親和素的多價特性使其能夠以高度親和力結合多達四個生物素分子。生物素通常與酶,抗體或靶蛋白綴合。
?
? ? ? ?生物素-鏈霉親和素系統的優點
?
? ? ? ?生物素-鏈霉親和素系統的主要優勢在于其提高檢測靈敏度的能力。這在很大程度上是由于鏈霉親和素的四聚體構象。一種鏈霉親和素蛋白具有以高親和力和選擇性結合四個生物素分子的能力。這種多樣性使得能夠放大微弱的信號,并以簡單的工作流程提高了對哺乳動物細胞或組織中中等和低豐度靶標的檢測靈敏度。
?
? ? ? ?另一個關鍵優勢是生物素-鏈霉親和素系統的多功能性。由于鏈霉親和素可以與多種報道分子標記物偶聯,因此幾乎可以將其摻入每個免疫測定中。例如,鏈霉親和素的酶結合物被用于酶聯免疫吸附測定(ELISA)中,而熒光標記的鏈霉親和素,例如iFluor?488鏈霉親和素,被廣泛用于細胞表面標記,熒光激活細胞分選(FACS)和其他熒光成像應用。
?
? ? ? ?應用領域
?
? ? ? ?酶聯免疫吸附測定(ELISA)
? ? ? ?免疫組織化學(IHC)
? ? ? ?Power Styramide?信號放大,可替代酪胺
? ? ? ?免疫印跡
? ? ? ?免疫熒光顯微鏡
? ? ? ?細胞表面標記
? ? ? ?親和純化
? ? ? ?熒光激活細胞分選(FACS)
? ? ? ?流式細胞儀
?
? ? ? ?生物素
?
? ? ? ?生物素是一個244道爾頓的半抗原小分子,由于它對鏈霉親和素的異常強的結合親和力通常被用來檢測和監測目標生物學靶標。生物素具有兩個特性,使其非常適合于生物綴合物的開發。? 首先,生物素的體積相對較小。這允許將多個生物素標簽標記為單個蛋白質或抗體,而不會顯著阻礙其生物反應性。其次,是生物素分子的戊酸側鏈。該鏈可被衍生化,以促進用于化學標記生物素的各種反應基團結合到蛋白質上,而不會改變生物素對鏈霉親和素的結合親和力。
?
? ? ? ?特色產品
?
? ? ? ?熒光生物素衍生物
? ? ? ?生物素化二抗
? ? ? ?生物素化核苷酸
? ? ? ?生物素化氨基酸
? ? ? ?活性生物素衍生物
? ? ? ?ReadiLink?蛋白質生物素化試劑盒
? ? ? ?Amplite?比色生物素定量試劑盒
?
? ? ? ?1. 熒光生物素衍生物
?
? ? ? ?熒光生物素衍生物在同一分子中同時包含熒光團和生物素部分。這些試劑用于通過熒光檢測和定量生物素結合蛋白。與鏈霉親和素與熒光生物素結合相關的強烈淬滅可用于精確測量鏈霉親和素(或抗生物素蛋白)的濃度。
?
? ? ? ?表1.熒光生物素衍生物
?
產品名稱 | Ex/Em (nm) | Ext. Coeff.1 | FQY2 | 規格 | 貨號 |
Biotin-4-fluorescein *CAS 1032732-74-3* | 492/518 | 80,000 | 0.7900 | 5 mg | 3006 |
Fluorescein biotin | 497/516 | 80,000 | 0.7900 | 5 mg | 3017 |
Cy5 biotin conjugate | 650/669 | 250,000 | 0.27 | 5 mg | 3100 |