放射免疫法快速檢測飼料中磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)...
磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類藥物的總稱，是一類用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。通過任何途徑攝入的磺胺類藥物會在人體中蓄積，其殘留能破壞人的造血系統，造成溶血性貧血癥、粒細胞缺乏癥、血小板減少癥等。國際食品法典委員會
(CAC)和歐美等大多數國家規定食品和飼料中的磺胺類藥物總量及磺胺二甲基嘧啶等單個磺胺類藥物的含量不得超過0.1
mg/kg。磺胺類藥物檢測方法有許多種，包括氣相色譜法、液相色譜法、薄層色譜法、酶聯免疫分析法、電導光譜法、熒光法、分光光度法等。但是這些檢測方法都存在處理過程繁瑣、操作時間長及只能檢測單種磺胺類藥物的問題。
Charm
II放射免疫分析法是采用放射性受體競爭的原理快速檢測藥物殘留的方法，此方法可檢測磺胺類藥物總量。這種檢測方法已經為美國FDA所認可，近幾年才引入中國。本實驗參考Charm
公司的資料，對飼料中的磺胺類殘留檢測進行了研究，建立了飼料中的磺胺類殘留的Charm II放射免疫分析方法。
一、材料與方法
（一）設備和材料
1、Charm II 6600/7600分析儀：美國Charm 公司生產；
2、IEC離心機；
3、研磨機；
4、渦旋混合器；
5、恒溫孵育器：85+1℃ ；
6、閃爍液加液器；
7、50mL離心管；
8、硼硅玻璃試管及試管塞；
9、藥片壓桿。
（二）樣品和試劑
1、基質：飼料；
2、試劑：磺胺類Charm II檢測試劑盒、閃爍液（Optifluor）、多抗標準品、MSU緩沖液、緩沖溶液M，以上試劑均由美國Charm 公司提供。
3、萃取緩沖液：用分析純鹽酸配成的0.1 mol鹽酸溶液和分析純的甲醇，按1：1的比例混合配成。
4、磺胺類藥物標準品：磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺甲基嘧啶（SM1）、磺胺喹I惡啉（SQ）、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺甲氧嘧啶（SM）、磺胺間二甲氧噠嗪（SDM）、磺胺吡啶（SPD）、磺胺二甲異嘿唑（SIZ）、磺胺甲基異惡唑（SMZ）、磺胺嘧啶（SD）、磺胺苯吡唑（SPP）、磺胺甲氧噠嗪（SMP）、磺胺氯噠嗪（SCP）。四環素、氯霉素、氨芐青霉素、卡那霉素標準品。以上標準品由Sigma公司提供。
（三）方法
1、測試原理
測定的基礎是競爭性受體免疫反應。用3H標記的磺胺二甲嘧啶(示蹤劑)與樣品中磺胺類藥物競爭結合試劑(微生物細胞上的特異性受體)上的磺胺結合位點，當樣品中殘留有磺胺類藥物時，殘留物與受體上的結合位點結合，從而阻止了
H標記的磺胺類藥物與結合劑位點的結合。樣品中的磺胺類藥物含量越高競爭的結合位點越多，3H標記磺胺二甲嘧啶的則越少，用Charm
II分析儀測定樣品中的。3H含量的cpm(每分鐘脈沖數)值，cpm值越低則樣品中的磺胺類藥物殘留量越高。
2、提取步驟
（1）取100 g飼料磨碎，稱取100g至離心管內。
（2）加入20 mL萃取緩沖液，加蓋。置搖床上混合10 min。
（3）1750 g（IEC離心機3.3×1000r/min）離心10 min。
（4）吸出上層液用于測試。
3、測定步驟
（1）用藥片壓桿的平端，將白色藥片壓入一潔凈的玻璃試管內。
（2）加300微升蒸餾水到試管內用渦旋混合器振蕩10s至藥片破碎。
（3）用加樣器加5 mL緩沖溶液M到試管內。
（4）用加樣器加0.2 mL樣品萃取液到試管內。
（5）用筆的平端，壓入粉紅色藥片。用振蕩器振蕩大約15s，使樣品上下l5次。置85_+1 cC孵育器內，孵育3min。
（6）1750 g（IEC離心機3.3×1000r/min）離心3min。
（7）離心停止后立即取出試管，倒掉上層液，用棉簽清除試管內殘漬，不要接觸沉淀物。
（8）加300微升蒸餾水到試管內，振蕩使沉淀物完全破碎。
（9）加3 mL閃爍液到試管內渦旋混勻至試管內無不均一的云狀物。
（10）試管放入Charm II 6600/7600分析儀內。
（11）按CharmII 6600/7600分析儀操作程序選項（檢測控制點需預先設定并輸入儀器），讀3H項的epm值。
4、陽性結果的確定
樣品的epm值小于控制點時，需要重新檢測樣品及同時測定一個陰性質控和一個陽性質控，以確定試劑和設備是否工作正常。
通常情況下：
（1）測試的陰性質控應該是陰性質控平均值~20％（每一試劑盒都會給出陰性質控平均值，平均值一般為運行3份陰性質控液的epm值的平均數）。
（2）測試的陽性質控應該小于控制點。如果重測樣品的epm小于控制點且上述兩條件符合，則判定樣品陽性
