包涵體沉淀溶解實驗

2019.9.13

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試劑、試劑盒	緩沖液 A N-十二烷基肌氨酸鈉（SKL) 考馬斯亮藍（CBB) 染色液脫色液快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑
儀器、耗材	SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%) 分子量標準參照物
實驗步驟	材料與設備 SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%) 分子量標準參照物試劑緩沖液 A N-十二烷基肌氨酸鈉（SKL)(20% 水溶原液）考馬斯亮藍（CBB) 染色液脫色液快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑 (見 P.172) (配方，見「試劑的配制」，PP.184~189) 操作程序 1) 第 2 次 2%D0C 懸液（見 p.149), 于離心前取 6x50-ul 等分試樣。然后將這些樣品用微型離心機全速離心 1 min, 棄上清。 2) 各沉淀物中分別加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的緩沖液 A。沉淀物劇烈重懸后靜置 10 min, 再用微型離心機離心 lmin，取上清樣品，供快速蛋白質斑點印跡試驗用（見 PP.172-173)，觀察沉淀物的多少。 3) 每份上清作 SDS 凝膠電泳，并與樣品 A、B—起做快速蛋白質斑點印跡試驗。 4) 作凝膠電泳分析時，于 10% 的 SDS 凝膠上，樣品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加樣 20ul, 分子量標準參照物加樣 3ul,120V(20mA) 電泳約 60 min。 5) 凝膠用 CBB 染色液染色 30 min 后，置脫色液中漂洗、脫色，直至顯現條帶。 ? ? ? ? ? ? 展開? ? ? ? ? ?

試劑、試劑盒

緩沖液 A N-十二烷基肌氨酸鈉（SKL) 考馬斯亮藍（CBB) 染色液脫色液快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑

儀器、耗材

SDS-PAGE 電泳裝置聚丙烯酰胺小膠（10%) 分子量標準參照物

實驗步驟

材料與設備

SDS-PAGE 電泳裝置

聚丙烯酰胺小膠（10%)

分子量標準參照物

試劑

緩沖液 A

N-十二烷基肌氨酸鈉（SKL)(20% 水溶原液）

考馬斯亮藍（CBB) 染色液

脫色液

快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑 (見 P.172)

(配方，見「試劑的配制」，PP.184~189)

操作程序

1) 第 2 次 2%D0C 懸液（見 p.149), 于離心前取 6x50-ul 等分試樣。然后將這些樣品用微型離心機全速離心 1 min, 棄上清。

2) 各沉淀物中分別加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的緩沖液 A。沉淀物劇烈重懸后靜置 10 min, 再用微型離心機離心 lmin，取上清樣品，供快速蛋白質斑點印跡試驗用（見 PP.172-173)，觀察沉淀物的多少。

3) 每份上清作 SDS 凝膠電泳，并與樣品 A、B—起做快速蛋白質斑點印跡試驗。

4) 作凝膠電泳分析時，于 10% 的 SDS 凝膠上，樣品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加樣 20ul, 分子量標準參照物加樣 3ul,120V(20mA) 電泳約 60 min。

5) 凝膠用 CBB 染色液染色 30 min 后，置脫色液中漂洗、脫色，直至顯現條帶。

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