垂直電泳槽的樣品制備和裝載過程
??? 垂直電泳槽是用來對少量的核酸及蛋白質樣品進行垂直電泳的裝置,玻璃板與墊條的一體化設計確保墊條表面及墊條制膠密封端的平整,徹底防止漏液,適用于生物學研究中,對核酸、蛋白樣品的分離、純化、制備等。今天就讓我們了解一下垂直電泳槽的樣品制備和裝載過程。
??? 1、將試管插入至制冷恒溫金屬浴,以解凍冷凍牛血清白蛋白樣品。 然后加入25μl 4X蛋白染料及75 μl的已解凍牛血清白蛋白溶液。
??? 2、把樣品加樣到凝膠中前,請在恒溫金屬浴中以95℃的溫度煮沸混合好的 BSA樣品、預染標記和 ProMarker,5分鐘。
??? 3、向凝膠中裝載樣品前,用100μl的移液器輕輕抽放緩沖液沖洗井孔讓樣品孔更平滑。在把樣品放入凝膠前,做簡單離心與混勻保證蛋白溶液濃度不變。在每個孔中注入10μl的蛋白質樣品。
??? 4、將安全蓋安裝到槽頂部,并將電極導線連接至電源。
??? 5、開始電泳:90V運行60分鐘,130V再運行60分鐘。
??? 6、電泳后,將膠鏟插入到兩玻璃板之間,輕輕來回撬動直到兩板分開,把凝膠從玻璃板上移除。除去上層膠,用考馬斯亮藍溶液染色下層分離膠15分鐘。
??? 7、將凝膠置于脫色緩沖液過夜震蕩進行脫色。
??? 8、通過凝膠成像分析系統的紫外/白光轉換板拍照。
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