SDS-PAGE電泳常見問題及解決方案
問題 | 原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
①出現“微笑”形帶（兩邊翹起中間凹下） | 由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠中 | 待其充分凝固再作后續實驗 |
②出現“皺眉”形帶（兩邊向下中間鼓起） | 主要出現在蛋白質垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除干凈 | 可在兩板間加入適量緩沖液，以排除氣泡 |
③帶出現拖尾 | 樣品融解效果不佳或分離膠濃度過大引起 | 加樣前離心；選擇適當的樣品緩沖液，加適量樣品促溶劑；電泳緩沖液時間過長，重新配制；降低凝膠濃度 |
④帶出現紋理現象 | 主要是樣品不溶性顆粒引起的 | 加樣前離心；加適量樣品促溶劑 |
⑤溴酚藍不能起到指示作用，即遇到溴酚藍已跑出板底，但蛋白質卻還未跑下來的現象 | 主要與緩沖液和分離膠的濃度有關 | 更換正確pH的緩沖液；降低分離膠的濃度 |
⑥電泳的條帶很粗 | 蛋白質樣品未濃縮好 | 適當增加濃縮膠的長度；保證濃縮膠貯液的pH正確（6.7）；適當降低電壓 |
⑦蛋白帶過寬 | 加樣過多或泄漏 | 適當減少上樣量 |
⑧電泳電壓很高而電流卻很低 | 這種現象一般初學者易出現。比如電壓50v以上，可電流卻在5mA以下。主要是由于電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。包括：a.內外槽裝反；b.外槽液過少；c.電泳槽底部的絕緣體未去掉（比如倒膠用的橡膠皮） | 電泳槽正確裝配即可? |
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