白色念珠菌的實驗室分離及注意事項
白色念珠菌即假絲酵母菌是假絲酵母菌病的病原菌。假絲酵母菌病在世界各地均有報告，發生于一切年齡、一切種族的男女中。因病原菌感染部位不同，可引起皮膚、黏膜、支氣管或肺發生病變，有時甚至引起敗血癥、心內膜炎、腦膜炎或其它內臟的炎癥。假絲酵母菌屬包括白假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、偽熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌、副克柔假絲酵母菌、類星型假絲酵母菌和季利蒙假絲酵母菌。假絲酵母菌病主要是由白假絲酵母菌引起。假絲酵母菌為芽生，有假菌絲，可產生厚膜孢子，但不產生子囊。
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【分離方法】
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取刮屑、拭子或痰、膿等臨床標本接種于加有青、鏈霉素的沙保葡萄糖瓊脂平板上，置37℃和室溫培養。經2天～4天，可見乳酪樣、中等大小、濕潤呈暗淡無光的菌落長出，有明顯的酵母樣氣味。
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【鑒定方法】
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1. ? 直接檢查：一般用于淺部假絲酵母菌病，取口腔病灶黏膜、陰道分泌物、皮屑、甲屑，也可作血、尿、糞、腦脊液、胸水、活組織或尸體解剖材料。制作KOH溶液或鹽水蓋玻片標本，觀察有無圓形或卵圓形的芽生孢子，有的亦可發現假菌絲或厚膜孢子。若查到大量假菌絲表明假絲酵母菌處于致病階段，對確診有一定意義.。革蘭染色陽性，著色不均勻。
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2. ? 培養檢查
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⑴ 在沙保葡萄糖瓊脂培養基上,于室溫及37℃培養均能生長, 逐日查看菌落生長情況。菌落為酵母樣菌落，呈奶油色，柔軟而光滑，陳舊培養物則顏色變深并逐漸變硬或有皺褶。鏡檢見有假菌絲及成群2～4μm×6μm大小的孢子（見圖29-1A）。
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⑵ 在瓊脂培養基上，則需10天左右才能形成中等大的暗色菌落。
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⑶ 在玉米瓊脂或米粉吐溫瓊脂培養基,于室溫培養，經25～28℃孵育24～48小時后生長出灰白色菌落，可查見有厚膜孢子形成。假絲酵母菌中僅白假絲酵母菌產生厚膜孢子，這是鑒定白假絲酵母菌的重要特征。
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⑷ 接種于0.2～0.5 mL人或動物血清中，37℃孵育3小時（不超過4小時），取一接種環血清在顯微鏡下觀察是否形成芽管。
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⑸ 在含0.005%氯化三苯基四氮唑的葡萄糖蛋白胨瓊脂上，接種物如為白假絲酵母菌，培養基不變色或僅呈淡紅色，而其它假絲酵母菌變為紅色。
3． ?厚膜孢子形成實驗
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材料：玉米-吐溫80瓊脂（配方及配制方法見附錄）及待檢菌
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方法：
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（1） ? ? ? 將培養基加熱溶化，取適量置于潔凈的載玻片上，待凝固。
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（2） ? ? ? 將待檢菌按水平方向穿刺接種于培養基內。
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（3） ? ? ? 將接種物置潮濕平皿內，室溫孵育24～72小時。
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（4） ? ? ? 將載玻片置顯微鏡下觀察。
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（5） ? ? ? 觀察結果。
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4． ?芽管形成實驗
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材料：無菌人血清及待檢菌。
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方法：在載玻片上加1滴無菌人血清，接種少量待檢菌，蓋上蓋玻片，將其置潮濕平皿內，35℃培養箱孵育，每隔1小時取出觀察芽管形成情況。
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5． ?動物接種：在假絲酵母菌屬中，只有白假絲酵母菌對實驗動物有致病性。靜脈接種1mL白假絲酵母菌1%鹽水混懸液于家兔，4天~5天內家兔可死亡，解剖可見腎臟腫大，有許多白色小膿腫分布在腎皮質上。注射于家兔皮內，于48小時可形成膿腫。白假絲酵母菌鹽水懸液靜脈注射或懸于5%豬胃粘液素中腹腔接種，對小白鼠有致病性。
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6． ?血清學檢查：
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（1） ?假絲酵母菌凝集實驗：以殺死的白假絲酵母菌作抗原實驗。有60%～75%病例其雙份血清滴度有4倍增長，正常人亦有低效價凝集素存在。
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（2） ? ?假絲酵母菌沉淀實驗：用對流電泳或免疫擴散法，用白假絲酵母菌細胞壁甘露聚糖或酵母細胞胞質抗原進行實驗，敏感性和特異性均好。
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【判定標準】
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1. ? 依據在玉米瓊脂上的生長物檢出假菌絲和厚膜孢子，可定為白假絲酵母菌。
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2. ? TTC沙保瓊脂上生長，培養基不變色或僅呈淡紅色，可定為白假絲酵母菌。
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3. ? 在血中或脊髓液中查到假絲酵母菌可以確診。
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4. ? 假絲酵母菌沉淀實驗可診斷全身性假絲酵母菌病。
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【注意事項】
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1. ? 從痰中分離出白假絲酵母菌不能作為假絲酵母菌病的唯一根據，應結合臨床作出判定。
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可根據對葡萄糖、乳糖、麥芽糖、庶糖等發酵實驗和培養特征對假絲酵母菌屬的菌種作出鑒別。
