T4DNA連接酶的內容與儲存方法
名稱:T4DNALigase數量:20ml 保存條件:-20℃
DNA連接
名稱:10xLigationBuffer 數量:100ml 保存條件:-20℃T4DNA接酶活性為3u/ml，單位定為Weiss單位（0.01Weiss單位活性的T4DNA接酶在16℃時20ml體系反應20分鐘，可以連接95%的1gλDNA-HindIII的酶切物）。無DNA外切酶或內切酶活性。可進行50次以上常規DNA接反應。低溫運輸，-20℃保存。有效期6個月。
10×LigationBuffer成分：
Tris-HClpH7.8600mM
MgCl215mM
DTT100mM
ATP10mM
連接條件
推薦在10~20ml反應體系中進行接反應，反應中DNA濃度最大可達1mM（1kbDNA約1mg/ml）。首先混合要接的DNA片段，加入10×LigationBuffer至終濃度為1×，再加入適量T4DNALigase混勻。最適連接溫度為16℃。粘末端連接效率較高，加入0.2~1mlT4DNALigase,可在室溫或16℃反應1~3小時完成反應；平末端連接效率較低，加入1mlT4DNALigase，通常需要在16℃或4℃過夜完成反應。
注意事項
1)10xLigationBuffer含有ATP，使用前應在室溫放置至融化或用手掌溫度輔助融化，然后置于冰上。不要加熱融化以免ATP降解。
2)T4DNALigase對熱敏感，容易失活。使用時請放置冰上，用后立即置冰箱中冷凍保存。
3)如需在接反應后滅活T4DNALigase，可于65℃孵育10min即可。
熱穩定DNA連接酶
熱穩定的DNA連接酶（thermostableDNAligase），是從嗜熱高溫放線菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分離純化的，一種能夠在高溫下催化兩條寡核苷酸探針發生連接作用的一種核酸酶。在85℃高溫下都具有連接酶的活性，而且在重復多次升溫到94℃之后也仍然保持連接酶的活性。在基因克隆實驗中具有重要作用。
