干細胞成骨和成脂誘導方法
一、成骨誘導體系：
1. 試劑
成骨誘導液：DMEM+10%FBS，雙抗，谷氨酰胺，誘導因子：
地塞米松：通過促進Cbfal mRNA和Osterix mRNA的表達而促進骨髓基質細胞向成骨細胞分化。
β-甘油磷酸鈉：可促進地塞米松對MSC的的誘導分化。
Vc：一種重要的營養素和氧化還原劑，在骨鹽代謝及骨形成中具有重要作用。在體外，它能增加鈣鹽的沉積，促進礦化結節的形成，并通過間充質細胞間接調節破骨細胞的分化。維生素C能直接抑制核因子κB受體活化子配體（RANKL）誘導的破骨細胞形成 。
2. 誘導步驟
（1）待干細胞達到80~90%融合時，消化。
（2）將干細胞接種于六孔板中，每孔約3x103個細胞，加入2ml / 孔干細胞完全培養液。放入37°C，5% CO2孵箱中培養。
（3）24h后，移去舊的培養液，加入2ml孔成骨誘導液。
（4）每三天換液，誘導2-3周。
（5）2-3周后，鈣結節形成，進行茜素紅染色。
二、成脂誘導體系：
1. 試劑
成脂誘導液A：DMEM+10%FBS，雙抗，谷氨酰胺，誘導因子：胰島素，IBMX，地塞米松，吲哚美鋅。
成脂誘導液B：DMEM+10%FBS，雙抗，谷氨酰胺，誘導因子：胰島素。
2. 誘導步驟：
（1）待干細胞達到80~90%融合時，消化。
（2）將干細胞接種于六孔板中，每孔約2x104個細胞，加入2ml / 孔干細胞完全培養液。放入37°C，5% CO2孵箱中培養。
（3）每三天進行換液（干細胞完全培養液），直至細胞達到100%融合。
（4）待細胞達到100%融合時，移去舊的培養液，加入2ml / 孔成脂誘導液A開始誘導。
（5）三天后更換成成脂誘導液B進行維持，24h后再更換成成脂誘導液A誘導，如此進行3個循環。
（6）當脂滴出現較多，但比較小時，可以用成脂誘導液B進行維持3-5天，脂滴增大。
（7）油紅O染色。
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焦點事件
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焦點事件
