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    PCR產物跑膠什么條帶都沒有是怎么回事

    2023.4.04

    做PCR時,最抑悶的一件事就是花了三個多小時,一點兒結果都沒有。以前做的時候,我也遇到這增的問題!所有的反應液和底物加好了,機器設好了,跑吧,跑完PCR了,好的,再來跑電泳檢測,結果,白花花一大片,什么都沒有,那一刻,覺得自己好失敗,別人的什么有,自己的什么都見不到,真想把機器給砸了。

    ????后來不斷的調整Taq酶的濃度,當然是增加了,有了一點兒效果,但是,還是不理想,再調整(降低)底物(DNA)的濃度,還是不行,再調整(稀釋到50倍),再做一次,有了,很是漂亮而又清晰的PCR產物的條帶!?那一刻,真是太高興了!緊接著,又做了一次,所有的樣品都有PCR產物了。

    ????總結一下,就是DNA的問題,它的濃度太高,而且在提取DNA時如果不純,那么里的雜質就會太多,只有通過稀釋DNA(同時也是稀釋雜質),才能使DNA在樣品里的濃度和雜質濃度的比值無限大,在這樣的條件下,只要有足夠的酶,那么,反應就能正常進行,得到預期的產物。因為,如果雜交的濃度過大,酶的活性就會受到抑制。

    ????因此,我的建議是:第一,稀釋底物濃度,分兩個梯度(25倍,50倍);


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