簡述PCR 產物純化
PCR 反應完成目標 DNA 的擴增后,PCR 產物可以用于進一步的研究,例如用于 DNA 測序、克隆、分析基因的功能和表達等。然而,通過 PCR 反應后體系中仍然存在具有活性的 DNA 聚合酶,剩余的 dNTP、引物以及反應緩沖體系中的各種金屬離子等。
因此,我們必須通過一定的方法從反應體系中提純 PCR 反應的擴增產物,才有利于進一步的分析研究。然而,實驗表明使用常規的苯酚/氯仿、乙醇沉淀等提取法并不能分離和滅活耐熱DNA 聚合酶。而這些存活的 DNA 聚合酶對后續的 PCR 產物的克隆等研究造成不同程度的影響,例如 DNA 聚合酶會使由限制性內切酶消化產生的3'末端凹陷被重新填充,因此,耐熱的 DNA 聚合酶的滅活分離一度成為多個實驗室克隆 PCR 擴增產物中遇到的一大難題。
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