免疫共沉淀（CO-IP）-實驗方法列表 - 分析測試百科網

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實驗方法>免疫共沉淀（CO-IP）

免疫共沉淀（CO-IP）

實驗方法

免疫共沉淀(Co-IP)詳細步驟教程

原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法

來源：互聯網關鍵詞：免疫共沉淀蛋白質

實戰指南——免疫共沉淀篇（進階）

IP前的準備工作： coIP：分為內源性蛋白的相互作用和非內源性蛋白相互作用（后者包括外源蛋白之間以及外源拖內源蛋白）

來源：互聯網關鍵詞：免疫共深沉 Co-IP

免疫共沉淀實驗步驟

免疫共沉淀樣品制備：電轉染CO-IP質粒入60 cm2 培養瓶，表達48h； 2. 吸干培液； 3. 加入預冷的RIPA Buffer（0.5ml/60 cm2培養瓶），冰上孵育10~3 0min； 4. 用預冷的細胞刮子將細胞從培養皿或培養瓶上刮下，把懸液轉到5EP管中； 5. 4℃，12000 rpm離心10~20 min，立即將上清轉移到一個新的離心管中； 6. 準備Protein G/A agarose，用PBS 洗兩遍珠子，然后用PBS配制成50%濃度，建議減掉槍尖部分，避免在涉及瓊脂糖珠的操作中破壞瓊脂糖珠； 7. 每1ml總蛋白中加入100 μl Protein G/A瓊脂糖珠（50%），4℃搖晃10 min（EP管插冰上，置水平搖床上），以去除非特異性雜蛋白，降低背景； 8. 4℃，12000 rpm離心15 min，將上清轉移到一個新的離心管中； 9. 測定蛋白濃度，定量，分裝后，可以在-80℃保存一個月； 10. 加入一定體積（2 ug）的IP抗體到500 μl總蛋白中，抗體的稀釋比例因興趣蛋白在不同細胞系中的多少而異； 1 4℃緩慢搖動抗原抗體混合物1h-Overnight； 12. 加入30~50 μl Protein G/A瓊脂糖珠來捕捉抗原抗體復合物，4℃緩慢搖動抗原抗體混合物3~5 h，如果所用抗體為鼠抗或雞抗，建議加2 μl“過渡抗體”（兔抗鼠IgG，兔抗雞IgG）； 13. 2000 rpm瞬時離心5 s，收集瓊脂糖珠-抗原抗體復合物，去上清，用預冷的RIPA buffer洗3遍，徹底吸盡上清； 14. 用60 μl 1×上樣緩沖液（加入巰基乙醇或DTT）將瓊脂糖珠-抗原抗體復合物懸起，輕輕混勻； 15. 將上樣樣品煮5 min，以游離抗原，抗體，珠子，離心，將上清電泳，收集剩余瓊脂糖珠，上清也可以暫時凍-20℃，留待以后電泳，電泳前應再次煮5 min變性

來源：互聯網關鍵詞：免疫共深沉 Co-IP

變性蛋白的免疫共沉淀方法詳解

免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法，是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法

來源：CST 關鍵詞：免疫共沉淀變性蛋白

免疫共沉淀的具體注意事項

免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法

來源：互聯網關鍵詞：免疫共深沉 Co-IP

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