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  • 實驗方法> 基礎免疫實驗> 補體試驗>聚乙二醇(PEG)沉淀實驗檢測CIC

    聚乙二醇(PEG)沉淀實驗檢測CIC

    關鍵詞: 聚乙二醇 來源: 

      PEG使IC沉淀的機理可能在于使其自液相中空間排斥而析出,此外,PEG還可抑制CIC解離,促進CIC進一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。在被檢血清中加入低濃度PEG,可將血清中的IC沉淀下來,利用透光率比濁或散射比濁法可測出CIC的存在與含量。本法簡便易行,國內已廣泛應用。

      1、試劑

      (1)0.1mol/L pH8.4硼酸鹽緩沖液(borate buffer solution,BBS) 硼酸(H3B03)3.40g,硼砂(Na2B407·10H20)4.29g,蒸餾水溶解后,加至1 000mL。用G3或G4玻璃濾器過濾。

      (2)PEG-NaF稀釋液 PEG6000 40.9g,NaF 10.0g,用BBS溶解后加至1000mL,用G3或G4玻璃濾器過濾。

      (3)熱聚合人IgG 將人IgC(10mg/mL)置63℃水浴加熱15rain,立即置冰浴內,冷卻后過Sepharose4B柱或SephacrylS-300柱,收集第一蛋白峰。所獲熱聚合人IgG可用考馬斯亮藍法測定蛋白含量。也可取人IgG(10mg/ml)10ml,攪拌下滴加1.8%戊二醛100uL,24h后加入0.4mol/LpH5.4,Tris-HCl緩沖液100uL終止反應,過Sepharose 4B或Sephacryl S-300柱,用0.01mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液洗脫,收集第一蛋白峰。加入牛血清白蛋白至0.5%,分裝后-40℃保存。試驗中可用作陽性對照和制備標準曲線。

      2、操作步驟

      (1)取待測血清0.15ml,加BBS0.3ml(1:3稀釋);

      (2)按表10-1加入各液(待測血清最終稀釋倍數為1:33,PEG最終濃度為3.64%);

      (3)將測試管及對照管置37℃水浴60rrfin;

      (4)分光光度計在波長495nm測吸光度,用對照管調零。

      3、結果判斷

      待測血清濁度值:(測定管吸光度—對照管吸光度)×100。以大于正常人濁度值的均值加2個標準差為CIC陽性。

      參考值:4.3±2.0,以大于或等于8.3為CIC陽性。或以不同濃度熱聚合人IgG按以上方法操作制備標準曲線,根據待測血清吸光度值查標準曲線,即可得IC含量(相當于熱聚合人IgG的ug/mL)。

      4、注意事項

      (1)低密度脂蛋白可引起濁度增加,故應空腹采血;

      (2)高丙球血癥或血脂含量過高及標本反復凍融,均可導致IC檢測出現假陽性;

      (3)此法快速、簡便,但特異性較差,較適用于血清標本的篩查。

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