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抗體的稀釋度稀釋液及稀釋度的測定方法
| 抗體的稀釋度包括特異性抗體，中間抗體及標記抗體。任何一種免疫組化方法要想得到令人滿意的染色效果，必須將抗體進行最佳稀釋。一般來說，抗體的稀釋度取決于下列因素。 (一)抗體的濃度(亦稱滴度) 每毫升溶液內所含抗體分子越多，滴度就越高，該抗體可高度稀釋，尤其是特異性一抗的稀釋度。一般商品化抗體只知道每毫升含多少抗體蛋白量，不知道所含抗體分子。自己制備抗體可通過瓊脂糖雙擴散或放射免疫法進行測定。 商品化抗體一般告知大約的稀釋度，例如用PAP法可1：100～1：200稀釋。但往往購買到一種新抗體后，需要利用組織切片進行最佳稀釋度的測定。 (二)稀釋度的測定方法 在測定抗體最佳稀釋度時，可將陽性強度與背景染色以“+”形式來表達，“+ + + +”為極強陽性，“+ + +”為強陽性，“+ +”為弱強陽性，“+”為弱陽性，“一”為陰性。1．直接測定法 按表2—4稀釋抗體，4℃過夜，觀察分析結果。從表2—4的結果中可知，400為最佳稀釋度，因其特異性染色強，且背景低。 表2-4 抗體稀釋度的直接測定法 一抗稀釋度 特異性染色強度 非特異性 一抗稀釋度 特異性染色強度 非特異性 l： 50 + + + + + + l：400 + + + (一) 1：100 + + + + + + 1：500 + + (一) 1：200 + + + + + 陰性對照 (一) (一) 1：300 + + +2．棋盤稀釋測定法 按表2—5稀釋、測定，從表中顯示的結果可知，一抗1：100、二抗1：200為最佳稀釋度。 表2-5 抗體稀釋度的棋盤稀釋測定法 第二抗體 一抗稀釋度 1 ： 50 l：100 1：200 1：400 1：100 + + + +(+ +) + + + +(+ +) + + +(一) +(一) 1：200 + + + +(土) +++(一) + +(一) +(一) 1：400 + +(一) +(一) (一) (一) 注：括號內為背景染色(三)抗體的配制 抗體的配制及使用是開展免疫組織化學工作的一個重要環節，其檢測的結果既要可靠，又要能重復，這就要求實驗人員在配制抗體過程中要注意其精確度。目前，隨著抗體稀釋液的穩定性提高，一次稀釋抗體可用一年。當然，還可以購買到商品化即用型一抗，使用非常方便。(四)抗體稀釋液的種類 可根據需要選擇不同的抗體稀釋液。如稀釋當天用完的一抗，用0．05m01／L(pH7.6)TBS即可。 如需長期保存，可用如下稀釋液：取0．1g明膠(或綠色明膠)溶在100ml0.05m01／L(pH7．6)TBS緩沖液中，邊攪拌邊加熱至60℃，待完全溶解后，冷卻至室溫，加入1g牛血清白蛋白，最后加入200mg aN3，分裝保存在一40℃中備用。另外，抗體原液應分裝后一40℃保存，可保存5年以上。 (責任編輯：大漢昆侖王) |
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