膠體金的制備

膠體金是氯金酸在還原劑作用下，聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電荷的疏水膠溶液。根據實驗需要，可以利用不同的還原劑制備成直徑大小不同的膠體金顆粒。

一、白磷還原法

試劑及材料

1. HAuCl4 水溶液

2. 0.2mol/L K2CO3

3. 白磷乙醚飽和液：在水中將白磷切成小片，用鑷子快速取出，在濾紙上吸干后，放入小瓶，迅速加入10ml純乙醚，塞緊瓶口，輕輕搖動至少2h，使乙醚充分飽和，倒入玻璃離心管中離心，棄去沉淀物及未溶解的白磷。取上清貯存于密閉的棕色瓶內。

操作方法一

1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml，用0.2mol/L K2CO3 調節至pH7.2，加熱煮沸；

2. 在剛開始煮沸時，迅速加入0.5ml白磷乙醚飽和液，搖勻，至溶液呈橙紅色為止。

3. 此法制備的膠體金顆粒直徑為3nm，大小較均一。

操作方法二

1. 取1.5ml 0.6%HAuCl4水溶液和1.4ml 0.2mol/L K2 CO3加至120ml雙蒸水中；

2. 再加1ml 白磷乙醚混合液，室穩攪拌15min；

3. 煮沸，回流至溶液由棕紅色變為紅色，約5min；

4. 此法制備的膠體金顆粒直徑為6nm。

二、抗壞血酸還原法

試劑及材料

1. HAuCl4 水溶液

2. 0.2mol/L K2CO3

3. 0.7%抗壞血酸水溶液

操作方法

1. 取1%HAuCl4 水溶液1ml置燒杯內，用1.4ml 0.2mol/L K2CO3 及25ml雙蒸水；

2. 混勻，置冰浴中，攪拌下加入1ml0.7%抗壞血酸水溶液，溶液呈紫紅色；

3. 隨后加蒸餾水至100ml，加熱至溶液變為紅色為止。

4. 此法制備的膠體金顆粒直徑為8-13nm。

三、枸櫞酸三鈉還原法

試劑及材料

1. HAuCl4 水溶液

2. 1%枸櫞酸三鈉水溶液

3. 0.2mol/L K2 CO3

操作方法一

1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml置于燒杯內；

2. 加入3ml 1%枸櫞酸三鈉水溶液，加熱煮沸30min，冷卻至4℃，溶液呈紅色；

3. 此法制備的膠體金顆粒直徑為10nm，大小均一。

操作方法二

1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml置于燒杯內；

2. 加入2ml 1%枸櫞酸三鈉水溶液，加熱煮沸15-30min，直至溶液呈紅色；

3. 冷卻后，加入0.5ml 0.2mol/L K2 CO3 混勻。

4. 此法制備的膠體金顆粒直徑為15nm，大小均一。

操作方法二

1. 取0.01%HAuCl4水溶液100ml置于燒杯內，加熱煮沸；

2. 根據需要加入2.5ml、1ml或0.75ml 1%枸櫞酸三鈉水溶液，繼續加熱煮沸5min，直至溶液呈橙紅色；

3. 此法制備的膠體金顆粒直徑分別為18-20nm、30nm或50nm，大小均一。

注意事項

1. 玻璃器皿必須嚴格清洗，絕對潔凈后干烤。最好經過硅化處理，或用第一次配制的膠體金穩定玻璃器皿表面后，再用雙蒸水清洗后使用。否則影響生物大分子與金顆粒結合和活化后膠體金顆粒的穩定性，不能獲得預期大小的膠體金顆粒。

2. 所有試劑均需要使用雙蒸水或三蒸水配制，最好用微孔濾膜（0.45um）過濾，以去除其中的聚合物和其他可能混入的雜質。

3. 配制膠體金溶液的pH值以中性為宜。將氯金酸配制成1%HAuCl4 水溶液，在4℃可保存數月穩定。