蟾蜍離體心臟灌流

[目的要求]

1 學習斯氏或八木氏離體蛙心灌流法。

2 了解心肌的生理特征。

3 觀察N a + 、K + 、C a + 及腎上腺素（Adr）、乙酰膽堿（ACh）等對離體心臟活動的影響。

[基本原理]

心臟具有自動節律性收縮的特性，可用于人工灌流的方法，研究心臟活動的規律及特點；還可觀察灌流液成分的改變對離體心臟活動的影響。

[動物與器械]

蟾蜍、蛙心套管、套管夾、支架、雙凹夾、滑輪、燒杯、常用手術器械、蛙板、蛙心夾、生物機能實驗系統、張力傳感器、滴管、培養皿、紗布、棉線、任氏液、0.65%N a CI、5%N a CI、2%C a CI 2 、1%KCI、1：5000腎上腺素、1：10000乙酰膽堿、300U/ml肝素

[方法與步驟]

1、 儀器 準備

打開 生物 機能試驗系統，接通張力傳感器輸入通道。選擇“蛙心灌流”實驗。

2、離體蛙心的制備

取一只蟾蜍，雙毀髓后背位置于蠟盤中，安上次實驗方法暴露心臟仔細識別心臟周圍的大血管（（圖）。 在左主動脈下方穿一線，于動脈圓錐處結扎（動物個體小時，結扎位置可靠上些）。再從左右兩主動脈下方穿一線，并打一活結備用。 左手提起主動脈上的結扎線，右手用眼科剪在結扎線下方， 沿向心方向將動脈上壁剪一斜口 。選擇大小適宜的蛙心套管，然后將盛有少量（套管內2～3cm高度）任氏液（內加入一滴肝素溶液）的斯氏蛙心套管，又開口處插入動脈圓錐（圖）當套管尖端到達動脈圓錐基部時，應將套管稍稍后腿， 使尖端向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進，經主動脈瓣插入心室腔內（于心室收縮時插入，但不可插得過深，以免心室壁堵住套管下口） 。 此時可見套管中血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動而上下移動，表明操作成功（否則需退回并重新插入） 。用滴管吸去套管中的血液，更換新鮮任氏液。穩定住套管后， 輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管用雙結扎緊（不得漏液） ， 再將結線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結線上方的血管 。輕輕提起套管和心臟，看清靜脈竇的位置，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈竇與心臟的聯系，使心臟離體（切勿損傷靜脈竇）。用任氏液反復沖洗心室內余血，使套管內灌流液不再有殘留血液。保持套管內液面高度一致（1.5～2cm），即可進行實驗。

3、將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉（不可加得過多，以免因夾破心室而漏夜）。再將蛙心夾上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。

注意：勿使灌流液滴到傳感器上。調節顯示器上心臟收縮曲線的幅度適中。

4、實驗觀察

（1）記錄正常心搏曲線。

（2）改用0.65%N a CI溶液灌流，并作好加藥標記，觀察心搏變化。待曲線出現明顯變化時，立即吸取套管中的灌流液，并做好沖洗標記，迅速用新鮮任氏液清洗2～3次，待心搏恢復正常。注意：換液時切勿碰套管，以免影響描記曲線的基線，同時保持灌流液面一致（以下同）。

（3）向套管內加2～6滴5%N a CI（較細的套管需少加）溶液，并作好加藥標記，觀察心搏曲線的頻率即振幅變化。當曲線出現明顯變化時，立即吸取套管中的灌流液，并做好沖洗標記，迅速用新鮮任氏液清洗2～3次，待心搏恢復正常。

（4）同法向套管內加入1～3滴2%C a CI 2 溶液，觀察并記錄心搏曲線的變化。當出現明顯變化時，立即更換任氏液，待心搏恢復正常（如果恢復遲緩，可多次沖洗）。

（5）向套管內加1～2滴1%KCI溶液，記錄心搏曲線變化。當心搏曲線變化時，同法更換灌流液，待心搏恢復正常。

（6）同法記錄套管中加入1～2滴的腎上腺素溶液（1：5000）后心搏曲線的變化。

（7）同法記錄套管中加入1～2滴乙酰膽堿溶液（1：10000）后心搏曲線的變化。

5、整理記錄，并將測量的心搏曲線數據填在圖的下方。

[思考題]

1、本實驗說明心肌的哪些生理特性？

2、用實驗說明內環境相對恒定的重要意義。

3、試分析任氏液中的鈉離子、鈣離子與鉀離子對心肌的作用。

4、為何強調實驗中保持灌流液面的恒定？灌流量對心臟活動會有什么影響？