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實驗16 血細胞的計數

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　　【目的要求】

　　學習紅細胞、白細胞計數的方法。

　　【基本原理】

　　血液中血細胞數的計算是使用血細胞計數板。而且要用適當的溶液將血液稀釋后，放入計數板的計數室內，在顯微鏡下計算一定容積血液稀釋液中的血細胞個數，再將所得結果換算為1mm3 血液中的血細胞個數。

　　【動物與器材】

　　兔、血細胞計數板、血紅蛋白吸管、1ml和5ml吸管、表面皿、顯微鏡、刺血針、酒精棉球、紅細胞稀釋液、白細胞稀釋液、95%酒精、乙醚、1%氨水。

　　【方法與步驟】

　　1．采血及稀釋用1ml吸管吸取0.38ml白細胞稀釋液放入表面皿內備用，另用5ml吸管吸取3.98ml紅細胞稀釋液放入表面皿內備用。

　　用酒精棉球消毒兔的耳緣靜脈采血部位，用刺血針刺破血管，讓血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血時，用血紅蛋白吸血管吸血至刻度20mm3 處，將血液吹入盛有白細胞稀釋液的表面皿內，吸上清液沖洗沾在管壁上的血液。立即將吸管洗凈和干燥備用。再用同樣方法吸取血液至刻度20mm3 處，并將血液吹入盛有紅細胞稀釋液的表面皿內，輕輕搖勻。2．血細胞計數板的結構計數板是一塊特制的長方形厚玻璃板，板面的中部有4條直槽，內側兩槽中間有一條橫槽把中部隔成二長方形的平臺（圖3-3）。此平臺比整個玻璃板的平面低0.1mm，當放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間距離（即高度）為0.1mm。平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數室（圖3-4），每個大方格面積為1mm3 ，體積為0.1mm3 。四角的大方格，又各分為16個中方格，適用于白細胞計數。中央的大方格則由雙線劃分為25個中方格，每個中方格面積為0.04mm3 ，體積為0.004mm3 。每個中方格又各分成16個小方格，適用于紅細胞計數。

　　稀釋后的血液滴入計數室前將表面皿搖振1-2min。將蓋玻片放在計數板正中，用小吸管吸取搖勻的稀釋血液，將一小滴血液滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細管現象而自動流入計數室內。如滴入過多，溢出并流入兩側深槽內，使蓋玻片浮起，體積改變，會影響計數結果，需用濾紙片把多余的溶液吸出，以深槽內沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經多次充液，易造成氣泡，應洗凈計數室，干燥后重做。紅細胞和白細胞的計數，各使用一計數室。

　　3．計數血液稀釋液滴入計數室后，須靜置2-3min，然后在低倍顯微鏡下計數。計數白細胞時，數四角4個大方格的白細胞總數；計數紅細胞時，數中央大方格的四角的4個中方格和中央的一個中方格（共5個中方格）的紅細胞總數。計數時應循一定的路徑，對橫跨刻度上的血細胞，依照“數上不數下，數左不數右”的原則進行計數（圖3-5）。計數白細胞時，如發現各大格的白細胞數目相差8個以上；計數紅細胞時，如各中方格的紅細胞數目相差20個以上，表示血細胞分布不均勻，必須把稀釋液搖勻后重新計數。

　　4．計算

　　白細胞數：將4個大方格內數得白細胞總數乘以50，即得每mm3 血內的白細胞總數，因為：

　　(1)稀釋液0.38ml加入血20mm3 （1ml=1cm3 =1000mm3 ，故20mm3 =0.02ml），使血液稀釋20倍，換算成未稀釋血時應乘以20。

　　(2)計數四角上4個大方格內的白細胞總數，其容積為1×1×0.1×4=0.4mm3 。換算成每mm3 時應乘以2.5。這樣把4個大方格內數得的白細胞總數乘以50（即20×2.5=50）即為每mm3 血內的白細胞總數。

　　紅細胞數：將中央大方格中的5個中方格內數得的紅細胞總數乘以10，000，即得每mm3 血內紅細胞總數。因為：

　　(1)稀釋液3.98ml加入血20mm3 （即0.02ml），使血液稀釋200倍，換算成未稀釋血要乘以200。

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　　(2)在計數室內只計數0.02mm3 （即1個中方格的容積為0.2×0.2×0.1=0.004mm3 ，5個中方格的容積為0.004×5=0.02mm3 ），換算成每mm3 時應乘以50。

　　這樣把5個中方格內數得的紅細胞總數乘以10，000（即200×50=10，000）即得每mm3 血液內的紅細胞總數。

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