此法具有標記率高、反應體積小（3ml水平）、可用低濃度的 125 I原料、對多肽 激素 和蛋白質的免疫活性損失小、穩定等優點，系常規的碘化方法之一。 　　1．原理　用Iodogen為氧化劑，對蛋白質和多肽抗原進行碘化標記，把 125 I直接引進分子中的酪氨酸殘基上。標記過程中被標記樣品不與Iodogen混合，標記后取出樣品即停止反應，不使用任何還原劑。 　　2．方法 　　（1）標記之前，先把Iodogen溶于有機溶劑，涂于管底，并使之干燥。 　　（2）標記時，將蛋白質溶液10～20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于 反應管 中， 反應管 置于冰浴中。碘化時， 125 I與蛋白質克分子之比例為1～1.2。反應時間在溫和的連續的攪拌下可達10min，從反應管中轉移出反應混合液，使其反應停止。反應液轉移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中，層析分離前再放置5min，使其未標記的碘離子還原成分子碘，以避免在帶有 緩沖液 的柱中使白蛋白碘化。 　　3．注意事項 　　（1）涂有Iodogen的反應管，有氮氣中密封，并貯存在-20 ℃ 條件下，至少可用3個月。打開管，使用時間很短。 　　（2）碘化反應時間，7min時標記率達最高，10min時略有減少。PH6.0～8.5時，標記率最高。 　　（3）Iodogen與蛋白質的比率是標記率的函數。最大的標記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。