改進接種的途徑：黏膜免疫

?????? 除少數例外，目前多數疫苗都采用肌內注射。開發經黏膜途徑導人的疫苗有很多好處，不僅更易被接種者接受，而且能在黏膜部位引發免疫反應。黏膜常是絕大多數病原體入侵的部位，然而黏膜免疫反應常不包括在經皮下注射或肌內注射的疫苗內。黏膜的表面積很大，人體黏膜總表面積達400平方米，相當于一個網球場的面積。黏膜表面是哺乳動物免疫系統(技能)的一個關鍵組成元件。絕大多數黏膜外表充滿有組織的濾泡和散在的抗原敏感淋巴組分，包括B淋巴細胞、T淋巴細胞、T淋巴細胞亞群、漿細胞以及涉及誘導和維持免疫反應的其他多種細胞組分。在外分泌中主要的同種型抗體是分泌型IgA(SIgA)。有趣的是在黏膜表面主要的效應細胞不是IgA B淋巴細胞，而是CD4+和CD8+表型的T淋巴細胞。曾估計T淋巴細胞可占整個黏膜淋巴樣總細胞群的約80％(Ogra，Faden和Welliver，2001)。 ? ?????? 為了在黏膜部位刺激免疫應答，保護性抗原需與特定佐劑一起提呈。大腸桿菌熱敏毒素(heat-labile toxin，LT)、霍亂毒素(cholera toxin，CT) 是已知最強的黏膜佐劑。這些毒素由兩個亞單位組成：A亞單位含酶活性，而B亞單位能結合神經節苷酯(GM：)和其他的(苷酯)糖脂。毒素的A亞單位被內吞入細胞內后即被蛋白酶切斷，與輔酶I? (NAD)結合并把ADP-核糖群轉到GTP―結合蛋白Gs的e亞單位，調節腺苷酸環化酶活性(Holmes，1997)。此酶呈持續激活態，使環腺苷酸(cyclicadenosinemonophosphate，cAMP)累積、水和電解質流失，此酶是這些毒素導致患者水樣腹瀉的病因(Levine等，1983；Field，Rao和Chang，1989)。 ? ?????? 定點突變是廣泛用來產生無毒但仍保持強黏膜佐劑活性的方法，曾用此法產生了50種突變體(Tsuji等，1990；Burnette等，1991；Lobet，Cluff和Cieplak，1991；Tsuji等，? 1991；Pizza等，? 1994；Dickinson和Clem―ents，1995；Douce等，? 1995；Fontana等，1995；De Haan等，? 1996；Douce等，? 1997；? Yamamoto等，? 1997；? Douce等，? 1998；Giuliani等，1998)。其中最看好的無毒變種是LTK63A亞單位中第63位殘基賴氨酸被絲氨酸替換)以及LTK7g飛A亞單位第72位殘基精氨酸被丙氨酸替換)。LTK63的酶活性完全喪失，極大劑量也不具毒性。LTK72雖仍殘留一些酶活性和毒性，但已較野生型毒素下降了多個數量級(Giuliani等，1998)。這兩種分子能與其合用的合成多肽以及細菌和病毒抗原在多種動物(如小鼠、兔、豚鼠、微型豬等)模型中產生黏膜免疫反應(Pizza等，2001)。這些變種黏膜佐劑在經鼻使用時若同時再加入有利于疫苗被黏膜吸收的納米顆粒，則其性能會更好(Baudner等，2002)。免疫學研究顯示，這些變種能致敏CD4+T淋巴細胞和對共導入抗原特異的CD8+CTL細胞，但與導人途徑無關(Simmons等，1999)。有趣的是，LTK63能增強對導入抗原的Thl和Th2反應，而LTK72雖增強Th2反應但抑制Thl反應。LTK63增強IL-12和TNF-a的產生及核因子NFxB的轉運；而野生型LT或LTK72不能激活NFgB，但能刺激cAMP的產生(Ryan等，2000)。