動物離體標本制備

一、蛙或蟾蜍坐骨神經－腓腸肌標本的制備

1. 實驗原理　蛙或蟾蜍等兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與溫血動物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經肌肉標本可較長時間保持生理活性，因此，在生理學實驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經腓腸肌離體標本來觀察神經肌肉的興奮性、興奮過程以及骨骼肌收縮特點等。

2. 實驗器材與藥品　蛙類手術器械和藥品1套，包括：蛙板、小玻板各1塊，粗剪刀、直剪刀各1把，大鑷子、小鑷子各1把，眼科剪刀1把、探針1根、玻璃分針2根，大燒杯、小燒杯各1個，滴管1支，培養皿1個，棉線，任氏液，鋅銅叉。

3. 實驗方法和步驟

（1）破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持刺蛙針從枕骨大孔向前刺入顱腔，左右攪動搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時，蟾蜍后肢立即失去緊張性，多數情況出現尿失禁。若腦脊髓破壞完全，可見蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

（2）剪除上肢和內臟：在骶髂關節上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側剪除所有內臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及緊貼于脊柱兩側的坐骨神經。

（3）剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝去全部后肢皮膚，將標本置于盛有任氏液的培養皿中。將手和用過的器械洗凈后再進行以下步驟。

（4）分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側游離出兩條坐骨神經，并于近脊柱處各扎一細線，然后在扎線與脊柱之間剪斷神經。提著神經上的細線，將兩條坐骨神經分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。

捏著兩側髂骨向反方向分離，使恥骨聯合脫臼后，沿恥骨聯合正中將兩下肢剪開，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。

（5）游離坐骨神經和剪斷股骨：認清坐骨神經溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周圍的結締組織，左手提著神經上的細線，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經溝細心剝離，直至將坐骨神經剝離到腘窩。

將游離干凈的坐骨神經放在下腿上，沿膝關節的周圍將大腿的所有肌腱剪斷，并用剪刀刮凈股骨下段附著的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱為坐骨神經下腿標本。

（6）游離腓腸肌：在坐骨神經下腿標本的基礎上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細線，左手提線，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關節。最后用粗剪刀在膝關節下將小腿剪去，留下的即為坐骨神經腓腸肌標本。

做好的標本用鋅銅叉的兩極輕輕接觸坐骨神經，如腓腸肌立即收縮，表示標本的興奮性良好，然后將標本放入任氏液中，待其興奮性穩定后再進行實驗。

4. 注意事項

（1）已剝離皮膚的組織避免接觸皮膚毒液或其他不潔物。

（2）分離神經時，一定要用玻璃分針，不能隨便用刀、剪進行操作。

（3）不能過分牽拉神經，以免造成損傷。

（4）標本制備過程中應適當地用任氏液濕潤標本。

（5）避免用手指或金屬器械接觸或夾持標本的神經肌肉部分。

二、離體蛙心標本的制備

1. 標本制備

（1）暴露蛙心：取蟾蜍一只，毀壞腦和脊髓，將其仰臥固定在蛙板上。從劍突下將胸部皮膚向上剪開或剪掉，然后剪掉胸骨，打開心包，暴露心臟和動脈干。

（2）觀察心臟的解剖結構：在腹面可以看到一個心室，其上方有兩個心房，心室右上角連著一個動脈干，動脈干根部膨大為動脈圓錐，也稱動脈球。

動脈向上可分左右兩支。用玻璃針從動脈干背部穿過，將心臟翻向頭側，在心臟背面兩心房下面，可以看到顏色較紫紅的膨大部分，為靜脈竇，這是兩棲類動物心臟的起搏點，觀察靜脈竇、心房、心室間收縮的先后關系。

（3）心臟插管：先用絲線分別結扎右主動脈、左右肺動脈、前后腔靜脈，也可以在心臟下方繞一絲線，將上述血管一起結扎，但此結扎應特別小心，勿損傷靜脈竇，以免引起心臟驟停。結扎時，可用蛙心夾在心舒期夾住心尖，將心臟連線提起，看清楚再結扎。

準備插管，在左主動脈下穿一絲線，打一松結，用眼科剪在左主動脈上向心剪斜口（一定要剪破動脈內膜），讓心臟里的血盡可能流出（以免插管后血液凝固）。用任氏液將流出的血沖洗干凈后，把裝有任氏液的蛙心插管插入左主動脈，插至主動脈球后稍退出，再將插管沿主動脈球后壁向心室中央方向插入，經主動脈瓣插入心室腔內。

此時可見插管內液面隨心搏上下移動。將預先打好的松結扎緊，并將線固定在插管壁上的玻璃小鉤上防止滑脫，用滴管吸去插管內液體，更換新鮮的任氏液，小心提起插管和心臟，在上述血管結扎處的下方剪去血管和所有的牽連組織，將心臟離體。此時，離體蛙心已制備成功，可供實驗。

2. 注意事項

（1）制備蛙心標本時，勿傷及靜脈竇。

（2）每次換液時，蛙心套管內液面應保持同一高度。

（3）隨時滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤。

三、離體主動脈條

1. 制備方法　取兔或大鼠一只，猛擊其頭致死，立即剖開胸腔，分離胸主動脈，盡可能于近心臟處把其切斷，迅速置于盛有克氏液并通以95%氧氣及5%二氧化碳的培養皿中，剔除血管外結締組織及脂肪，洗去凝血塊，輕輕套在較主動脈稍小的玻璃棒上。

然后用眼科剪把主動脈作螺旋形剪開，制成寬約3mm、長1.5~2cm的主動脈條，兩端分別用線結扎，置于盛有克氏液并通以95%氧氣及5%二氧化碳的恒溫37℃的麥氏浴管內，平穩90~120min后進行實驗。也可把胸主動脈剪成多個寬2mm的動脈環代替血管條做實驗。

2. 注意事項

（1）本標本勿用手拿，應以鑷子夾取，且不可在空氣中暴露過久，以免失去敏感性。

（2）克氏液必須用新鮮蒸餾水配制。

（3）余下的動脈條連同克氏液置于4℃冰箱中，1~2天內仍可用做實驗；采用大白鼠主動脈條時，可制成寬2~2.5mm，長2~3cm。

四、離體氣管標本制備

1. 氣管連環標本　豚鼠1只，體重500g，用木槌擊斃，立即從腹面正中切開皮膚和皮下組織，細心分離出氣管，自甲狀軟骨下剪下整段氣管，置于盛有Kerbs營養溶液的平皿中，剪除氣管周圍組織。

從軟骨環之間由前向后和由后向前進行交叉橫切，均不完全切斷而保留一小段。從上到下約橫切10～15處。然后兩端縫上線，一端固定，另一端拉開，即成氣管連環。

2. 氣管螺旋條標本　將氣管由一端向另一端螺旋形剪成條狀，每2～3個軟骨環剪一個螺旋。亦可用一根直徑2～3mm的玻璃棒或竹棒，將氣管套在其上，用剪刀剪成或用手術刀切成螺旋狀。整個螺旋長條可作一只實驗標本，也可用半段螺旋條做一標本。

注意事項：分離氣管及制作氣管螺旋條標本時，動作要敏捷而輕柔，切勿用鑷子夾傷氣管平滑肌。

（王躍民）