PRINS步驟
關鍵詞: prins 步驟來源: 互聯網
???1、常規脫蠟浸入0.01mol/LPBS; ????2、用0.2mol/L鹽酸處理5min; ????3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15min; ????4、分別用80%,95%和100%酒精脫水,室溫干片; ????5、加PCR混合液25μL(10mmol/L Tris-HCl,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,各加200μmol/L dATP,dCTP,dGTP,1.5mmol/L dig-11-dUTP l.5μl,引物250ng,Taq DNA聚合酶2U),加蓋片; ????6、94℃變性5min后置入65℃濕盒中5min; ????7、用0.1×SSC液,65℃洗5min; ????8、片于65℃ 10s~20s;用4×SSC-0.1%吐溫20液42℃洗5min,2次; ????9、經Buffer I液洗后滴加20%羊血清封閉30min; ????10、加地高辛抗體復合物(1:500)室溫下2h; ????11、BufferⅢ液洗5min; ????12、用BCIP-NBT顯色1h~2h,在鏡下控制,終止顯色; ????13、用中性紅或核固紅襯染,酒精脫水,二甲苯透明,樹脂封片
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