假定你抽提 RNA 時使用到的有機 試劑 - 氯仿、異丙醇、無水乙醇 - 都是國產的 (這是完全可以使用的)。我的問題是：你采取了什么措施來降低或者杜絕 RNase 的污染？具體地： 你是如何選擇、預處理、使用和保存氯仿和異丙醇？ 你是如何配制和保存 75% 乙醇？ 坦率地講，因為有機 試劑 的問題導致抽提失敗，我真沒有聽到；或許有的問題是由有機試劑導致，但使用人也多是不會懷疑到這一點的。恐怖分子的行為倒是聽到過：對氯仿、75% 乙醇進行高壓滅菌處理。令我無言的是，這樣的恐怖行為既沒有導致恐怖的后果，也沒有影響實驗的成功。 不過我還是想提供一些建議。我關注的是質量控制，而不是單單是簡單或者方便。 RNA 抽提中涉及的有機試劑，包括苯酚、氯仿、異丙醇、乙醇。苯酚多為商品化的東西了，選擇和保存都不應該有什么問題；只強調一點：盡管 Tris 飽和的苯酚也可以用于 RNA 的抽提，但使用水飽和苯酚會更好一些，因為 RNA 在 pH 7 以上的溶液中，發生降解的機率大大提高。下面是關于氯仿、異丙醇、乙醇的有關建議。 選擇 國內大的化學試劑公司生產或者監制的分析純級別試劑就完全可以滿足要求。 預處理 不需要進行任何的預處理。絕對不可以高溫高壓滅菌：這不是該不該的問題，而是能與不能的問題。這三個試劑的沸點都低于 100C，高溫高壓可能導致危險。 75% 乙醇的配制 一份無菌無酶的水與 3 份 (體積)無水乙醇混勻即成。不要使用量筒等過渡容器，使用天平來秤量：水的比重為 1，無水乙醇的比重按 0.785 計算。是先將無水乙醇倒出部分后再加入水，還是往裝水的瓶子中加入無水乙醇，沒有什么區別。事實上，70% - 80% 的乙醇都具有較好的洗滌能力，同時也不會導致片段比較大的核酸的丟失，所以，配制時就不要為了準確而左勾右兌的。關于現用現配，從質量控制角度看，不是一個好的辦法；這也是你永遠發現不了75% 可能會有問題的基礎。75% 乙醇也不可以高溫高壓滅菌，原因同無水乙醇。 保存 首先，要使用新的試劑；試劑架上別人使用過并寫有標記的，一定要找當事人確定，以防已被用于其它用途而標記未改。其次，分成相對小一點的包裝 (50ml – 100ml)；500ml 的瓶子取液是非常不方便的， 移液器 的桿子往往都進入了瓶口里，非常容易造成污染。第三，塑料瓶子密閉性好，裝醇類試劑是非常好的選擇；但氯仿絕對不要使用塑料瓶子。第四，蓋緊瓶蓋，作好標記，再在瓶子上蓋上一個透明塑料袋防塵。第五，保存于室溫。 將有機試劑保存于冰箱的人不在少數，但這么做卻是令人奇怪的。首先，任何揮發性的東西都不保存在冰箱 (除非萬不得已，如 DEPC)，這應該成為一個良好的習慣。其次，與外面相比，冰箱除了灰塵少一點外，什么都會比外面多的。第三，在室溫打開低溫的瓶子，將導致空氣大量進入瓶子，增加了污染的風險。 使用 非常幸運的是，有機試劑對菌污染和酶污染似乎有我們想象不到的抑制和滅活作用，所以，使用這些試劑沒有特殊的要求，按正常抽提 RNA 的要求就完全可以了。吸取有機試劑時，最好使用比要吸取的體積大的 移液器 ，因為有機試劑有越吸越多的現象，試劑容易接觸到移液器的桿頭 – 污染不說，氯仿會腐蝕桿頭的。75% 乙醇使用一次性的 吸管 移取，一次可以吸數 ml，既快又方便。如果舍不得丟棄，用完后放入塑料自封袋中保存，是非常安全的。