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構建無需限制性內切酶和連接酶的cDNA文庫
CloneMiner? cDNA文庫構建試劑盒(CloneMiner? cDNA Library Construction Kit)使你能夠得到具有高度代表性cDNA 文庫，而不需要用限制性內切酶來切斷你寶貴的基因。現在你能從高質量的cDNA文庫中分離完整的全長基因。
克服文庫構建的缺陷 傳統的cDNA文庫構建途徑有許多與生俱來的缺陷：1)cDNA合成不佳，2)連接效率低，3) 在限制性酶切過程中造成克隆缺口或者斷裂。任何一種缺陷都有可能造成目的克隆的丟失，尤其對于低豐度的基因。如果你確實得到克隆，仍有可能被限制性內切酶消化或者在接下來的亞克隆步驟中丟失，這是由于連接反應的無效造成的。CloneMiner? cDNA 文庫構建試劑盒提供了一種全新的更加有效的構建文庫的途徑，而沒有限制性內切酶克隆法的局限。 高質量cDNA文庫的構建 新的CloneMiner? 試劑盒利用兩種先進的技術使你能夠獲得全長基因百分比高并且能夠消除文庫構建中限制性酶切引起的偏差· SuperScript? II逆轉錄技術從初始的mRNA材料中得到全長cDNA的百分比很高。SuperScript? II逆轉錄酶（RT）的Rnase H活性低，能極大減少第一鏈合成時RNA的降解。 · GateWay?技術，一種已經深入了解的位點特異性重組系統，介導了文庫的構建過程。這使得您的cDNA片段轉入到GateWay?供載體以構建整個文庫。然后就可以通過GateWay?技術將DNA重組到各種各樣的表達載體上。反應保持了原有的方向和開放閱讀框，所以不需要多余的重復驗證。有效地避免了限制酶和連接酶的使用。您可以構建高質量的文庫用于高效深入的分析。 ?
| 圖1 CloneMiner? cDNA文庫構建方法 1. 起始mRNA 2. 退火的寡聚dT－attB2－Biotin 引物 3. 用SuperScript? II逆轉錄酶合成第一鏈和第二鏈cDNA 4. 連接attB1接頭 5. 加上接頭的cDNA和pDONR?222載體混合在BP Clonase?酶存在時構建入門文庫 6. 得到的入門克隆有attL位點；產生的副產物是自由的ccdB基因 7. 轉化E.coli并選擇抗卡那霉素的克隆 ? ? ? 獲得全長的完整的克隆 傳統的克隆方法需要使用限制酶來改變您的cDNA末端，以適合克隆載體，這存在一種風險，即您的基因可能被同樣的酶切成幾段。通過使用GateWay?技術來替代限制酶，CloneMiner? 試劑 盒避免了這種風險。沒有任何克隆暴露在限制酶中，所以提供了最佳的克隆代表性和100％的全長的完成cDNA（ 圖2 ） ? |
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