總RNA提取方法的 步驟 基本相似，主要包括以下幾個基本步驟：一是徹底破碎果實細胞的細胞壁；二是使核蛋白復合體中的蛋白質充分變性，實現核蛋白與核酸的分離；三是抑制內源和外源RNA酶的活性，防止RNA受污染而降解，這是能否成功獲得高質量RNA的關鍵步驟；四是將RNA與DNA、蛋白質、多酚、多糖等物質分離；五是檢測RNA的質量。

酚類物質 很容易被氧化成褐色的醌類物質，醌類物質與 RNA不可逆的結合，不僅會使RNA的活性喪失，而且在苯酚和氯仿抽提時還會使RNA丟失。

　　常見的 去除多糖的方法 有低濃度乙醇沉淀法、醋酸鉀沉淀法、氯化鋰沉淀法、提高緩沖液的氯化鈉濃度等。

在用苯酚、苯酚：氯仿進行抽提后，加入1/15體積3 mol/L NaAc ( pH 5.2 ) 和1/5體積的無水乙醇混勻,并在冰浴上靜置2 h，可促進多糖沉淀而不聚沉RNA分子；最后在棄除多糖沉淀的上清液中加入終濃度為0.3 mo1/L的NaAc和3倍體積的無水乙醇，并于-70℃下放置3 h后過夜，即可獲得高質量的RNA。

　　 RNA 的沉淀方法 很多，如LiC1、異丙醇、NaAc和無水乙醇等。但是前者所得的RNA的產率比后兩種方法高很多，且純度好，沒有DNA污染，不需要進行去除DNA的純化操作，減少了RNA降解的幾率；

LiC1沉淀大片段RNA的效果好，更適于進行后續的分子生物學試驗；

而異丙醇沉淀獲得的沉淀體積大，導致了多糖和酚類物質的共沉淀作用；

1/10體積3 mol/L的NaAc和2.5倍體積的無水乙醇所得的RNA產率較低，且和異丙醇沉淀一樣存在基因組DNA的污染，后續的純化操作提高了RNA提取的成本且增加了降解的機會。

　　 CTAB 作為離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使RNA得以游離出來，較其他幾種 試劑 更能有效去除多糖和酚類等物質。

　　 β - 巰基乙醇 是一種強還原劑，可以抑制多酚的氧化和酶的水解，釋放出細胞中的RNA。可以降低酶類(尤其是氧化酶類)的活性（通過打斷多酚氧化酶的二硫鍵使之失活），還可以抑制RNA酶的活性。

PVP 是酚類化合物的螯合劑，可與多酚化合物形成復合體，使之不被氧化成醌類物質，有效地防止其與RNA的結合，提高RNA的完整性。

異硫氰酸胍 可以抑制RNA酶、防止RNA的降解。異硫氰酸胍作為強變性劑使核酸一蛋白結構發生變化，并有效解離 核蛋白 與核酸的復合體， 與β-巰基乙醇共同對RNase產生強烈的抑制作用，這樣能破裂細胞并迅速釋放核酸。

LiC1 選擇性沉淀RNA，沉淀過夜可以有效地去除多糖，進一步除去RNA中的DNA污染。LiCl還可以沉淀剩余的酚類物質。

EDTA 螯合二價金屬離子，抑制RNA酶的活性，防止RNA降解。

Tris -HCl 不僅起緩沖作用，還可防止RNA降解。

NaC1 溶液可提供緩沖反應環境。

苯酚和氯仿等有機溶劑 的提去除蛋白質、多糖和酚類等雜質。苯酚和氯仿等有機溶劑能使蛋白質變性并使抽提液分相，由于RNA溶于水相，因此經離心后即可從抽提液中去除細胞碎片和大部分蛋白質。

苯酚在低pH的情況下能促進水相中的蛋白和DNA向有機相分配，從而最大限度的除去總RNA中的蛋白和DNA。