原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。

用途：檢測樣品中是否含有基因的轉錄產物（mRNA）及其含量。

實驗方法：

[儀器、試劑、材料]

（一）儀器

恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。

（二）材料

總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜

（三）試劑

NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），瓊脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，雙氧水, 滅菌水等。

[方法與步驟]

1. 用具的準備：

180度烤器皿：三角錐瓶、量筒、鑷子、刀片等4小時。

電泳槽：清洗梳子和電泳槽，并用雙氧水浸泡過夜，用DEPC水沖洗，干燥備用。

處理DEPC水(2 L)備用。

2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染

用RNAZap擦洗梳子，電泳槽，刀片等，然后用DEPC水沖洗二次，去除RNAZap。

3．制膠：

1)． 稱取0.36mg 瓊脂糖加入三角錐瓶中，加入32.4mlDEPC水后，微波爐加熱至瓊脂糖完全熔解。60℃空氣浴平衡溶液 (需加DEPC水補充蒸發的水分)

2)． 在通風廚中加入3.6ml的10＊Denaturing Gel buffer，輕輕振蕩混勻。

注意盡量避免產生氣泡。

3)． 將熔膠倒入制膠板中，插上梳子

如果膠溶液上存在氣泡，可以用熱的玻璃棒或其它方法去除，或將氣泡推到膠的邊緣。注：膠的厚度不能超過0.5cm。

4)．膠在室溫下完全凝固后，將膠轉移到電泳槽中，加入1x MOPS Gel Running buffer蓋過膠面約1cm，小心拔出梳子。（配制250ml　1＊MOPS Gel Running buffer，在電泳過程中補充蒸發的buffer。）

5)．檢查點樣孔。

4. RNA樣品的制備

在RNA樣品中加入3倍體積的formaldehyde load dye和適當的EB（終濃度為10ug/ml）。混勻后，65℃空氣浴15min。短暫低速離心后，立即放置于冰上5min。

5. 電泳：

1). 將RNA樣品小心加到點樣孔中。

2). 在5V/cm下跑膠（5ｘ14cm）。在電泳過程中，每隔30min短暫停止電泳，取出膠，混勻兩極的電泳液后繼續電泳。當膠中的溴紛藍（500bp）接近膠的邊緣時終止電泳。

3). 紫外燈下，檢驗電泳情況，并用尺子測量18S、28S、溴紛藍到點樣孔的距離。

注意不要讓膠在紫外燈下曝光太長時間