1．酶標抗體的活性鑒定 一般以 瓊脂 擴散和免疫電泳進行鑒定。使酶標抗體和相應的抗原(抗原濃度為1mg/ml)產生沉淀線,洗滌后于底物溶液中顯色,顯色后用生理鹽水漂洗,沉淀線不褪色,說明酶和抗體都具有活性。良好的酶標結合物 瓊脂 擴散滴度一般應在1：16以上。

2．酶結合物的定量測定 包括酶量、IgG含量、酶與IgG克分子比值以及結合率的測定。

酶量(μg/ml)=OD 403nm ×0.42

（1）戊二醛法：IgG(mg/ml)=(OD 280nm －OD 403nm ×0.42)×0.94×0.62

(OD 403 ×0.42為酶在403nm的光密度， 抗體 與酶－戊二醛結合后OD 280nm 約增加6%，所以乘以0.94校正。由于兔IgGOD 280nm =1.0時為0.62mg，所以又乘以0.62)。

（2）過碘酸鈉法：IgG(mg/ml)=(OD 280 －OD 403 ×0.30)×0.62

(3)克分子比值=(酶ug/m) /40000/[(IgG mg/ml) / 160 000]=酶X4 /IgG

(40 000和160 000分別為辣根過氧化物酶和IgG的分子量)。

⑷ 酶結合率=結合物中的酶量/標記時加入的酶量×100%。

⑸ 酶標記率：OD 403nm /OD 280nm 即酶中正鐵血紅素輔基的吸光度(403nm)與 抗體 －酶蛋白中的色氨酸、酪氨酸的吸光度(280nm)之比表示HRP在Ab E 中所占的比例，它與E/Ab克分子比值呈高度正相關。

3．酶結合物的質量標準 純化的酶結合物的質量標準應包括以下幾個方面。

（1）酶的催化活性。

（2）免疫學活性。

（3）未聯接的游離酶的量。

（4）未聯接的原始免疫反應物的量。

（5）每個酶分子所聯接的免疫反應物分子數目。

（6）生化性質。

（7）酶標記免疫試驗效果。

酶結合物的質量差異,可引起試驗敏感度的很大變化。例如用不同的程序制得的HRP－IgG結合物進行酶標記免疫試驗，可得到不同的試驗結果，故應予重視。

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用于ELISA酶標抗體的各項指標參數