抗凝血DNA的提取方法

1. 分離外周血白細胞 (1)取患者肘靜脈血5ml，EDTA抗凝，2500rpm離心10 min。 (2)小心吸取上層血漿，分裝到3個0.5ml離心管中。 (3)在血細胞中加入3倍體積的溶血液，搖勻，冰浴15 min。 (4)2500rpm離心10 min，棄上清。 (5)加入10ml溶血液，搖勻，冰浴15 min。 (6)3000rpm離心10 min，棄上清。 (7)倒置離心管，去掉殘液。 (8)得白細胞，－80oC凍存。 2. 從白細胞中提取基因組DNA?? (1)取白細胞，加4.5ml SE，使勁吹打，混勻。 (2)沿管壁加入0.5ml的10％SDS。 (3)加蛋白酶E 50μl／管。 (4)首尾輕搖10 min，混勻。 (5)37oC水浴過夜。 (6)第二天取出，沿管壁加3 ml飽和NaCL，迅速手搖15秒，使蛋白變性析出。 (7)4000rpm離心10 min。 (8)取出上清，放于另一管中，加入等體積的三氯甲烷，混勻15 min。 (9)2500rpm離心10 min。 (10)取出上清，加入等體積的三氯甲烷，混勻10 min。 (11)2500rpm離心10 min。 (12)取上清，轉入50ml管中，加3倍體積無水乙醇。 (13)首尾輕搖，見DNA絮狀沉淀析出。 (14)將DNA挑至管壁，75％乙醇洗滌2遍。 (15)將DNA挑至0.5ml管中，凍干。 (16)加TE 300μl，使DNA溶解，4oC保存。