一、實驗目的： 了解植物DNA提取和純化的一般方法。 二、實驗原理 ： 天然狀態的DNA 是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細胞核中。要從細胞中提取DNA時，先把DNP抽提出來，再把蛋白質和糖去除，同時除去RNA及無機離子等，從中分離DNA。提取植物DNA的方法主要采用SDS和CTAB法。兩種方法均采用去污劑裂解細胞并保護DNA不受內源核酸內切酶降解。具體方法簡單說來就是利用液氮對植物組織進行研磨，從而破碎細胞。細胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破壞細胞膜，使蛋白質變性而沉淀下來。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液經乙醇沉淀。 SDS法:SDS是有效的陰離子去垢劑,細胞中DNA與蛋白質之間? 常借靜電引力或配位鍵結合,SDS能夠破壞這種價鍵。CTAB法:CTAB是一種陽離子去垢劑，它可以溶解膜與脂膜，使細胞中的DNA-蛋白質復合物釋放出來，并使蛋白質變性，使DNA與蛋白質分離。這里我們使用SDS法。 DNA純化：蛋白質常用苯酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）或氯仿：異戊醇（24：1）抽提。RNA 常選用RNase消化 ，或是用LiCl來消除大分子的RNA。酚類物質 提取液中加少量巰基乙醇，選取幼嫩的材料。多糖提取液中加1％PVP。 三、實驗材料與 儀器 ： 植物葉子，DNA提取緩沖液，24:1/氯仿:戊醇，其它 試劑 ：液氮、TE緩沖液、無水乙醇、70%乙醇，研缽，水浴鍋，離心機，移液器等。 四、實驗步驟： 1.取新鮮葉片約3g, 剪碎, 加入液氮充分研磨后轉移至2ml離心管中； 2.在65℃預熱的提取液中按3.8g/L加入Na Bisufite, 混勻并調pH至8.0； 3.在管中加入適量提取液，60℃水浴保溫約30min，不時顛倒混勻； 4.冷卻至室溫后加入等體積氯仿/異戊醇，用力搖勻后，放置搖床上搖15分鐘左右； 5.室溫下10000rpm離心15min，小心吸上清于新的離心管中，加入兩倍體積的冷酒精-20 ℃放置1h或過夜； 6.挑出DNA置于新的管中，挑出有困難時可以低速離心后倒去上清。加入適量70%酒精，搖動洗滌10min，重復洗滌2-3次； 7.吹干DNA，加入適量TE在65℃溶解，完全溶解后離心去除雜質； 8.加入RNase（10mg/mL）,室溫處理0.5-1h,除去RNA，4℃或-20℃貯存。 9.如需純化DNA，再加入適量TE，氯仿/異戊醇多次抽提后吸取上清，加入3ml/L NaAc和兩倍體積的乙醇，-20 ℃放置1h或過夜； 10.吹干沉淀后，加入適量TE， 65℃溶解， 4℃或-20℃貯存。