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  • 實驗方法> DNA實驗技術> DNA蛋白相互作用>實驗所用培養基和試劑

    實驗所用培養基和試劑

    關鍵詞: 培養基 試劑來源: 互聯網

    1、營養瓊脂培養基 成分: 蛋白陳 ? ? ?10 g 牛肉育 ? ? ?3 g 氯化鈉 ? ? ?5 g 瓊脂 ? ? ? ?15-20 g 蒸餾水 ? ? ?1000 mL 制法: 將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內,加入15 %氫氧化鈉溶液約2 mL校正pH至7.2-7.4,加入瓊脂,加熱煮沸使瓊脂溶化,分裝于燒瓶內,121 ℃高壓滅菌15 min。 注:此培養基可供一般細菌培養之用,可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數,瓊脂量為1.5 %;如作成平板或斜面,則應2 %。 2、乳糖膽鹽發酵管 成分: 蛋白胨 ? ? ?10 g 豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) ? ? ?5 g 乳糖 ? ? ? ?10 g 0.04 %溴甲酚紫水溶液 ? ? ? 24 mL 蒸餾水 ? ? ? 1000 mL pH7.4 制法: 將蛋白陳、膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10 mL,并放入一個小倒管,115 ℃高壓滅菌15 min。 注:雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。 3、乳糖發酵管 成分: 蛋白胨 ? ? ?20 g 乳糖 ? ? ? ?10 g 蒸餾水 ? ? ? 1000 mL 0.04%溴甲酚紫水溶液 ? ? ? 25 mL pH7.4 制法: 將蛋白陳及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,按檢驗要求分裝每管30 mL、10 mL或3 mL,并放入一個小倒管,115 ℃高壓滅菌15min。 注: ①雙料乳糖發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。 ②30 mL和l0 mL乳糖發酵管專供醬油及醬類檢驗用,3 mL乳糖發酵管供大腸菌群證實試驗用。 4、麥康凱瓊脂 成分: 蛋白胨 ? ? ? 17g 朊胨 ? ? ? 3 g 豬膽鹽(或牛、羊膽鹽) ? ? ?5 g 氯化鈉 ? ? ?5 g 瓊脂 ? ? ? ?17 g 蒸餾水 ? ? ? 1000 mL 乳糖 ? ? ? 10 g 0.01 %結晶紫水溶液 ? ? ?10 mL 0.5 %中性紅水溶液 ? ? ?5 mL 制法: ①將蛋白胨、朊胨、膽鹽和氧化鈉溶解于400 mL蒸餾水中,校正PH7.2,將瓊脂加入600 mL蒸餾水中,加熱溶解,將兩液合并,分裝于燒瓶內,121 ℃高壓滅菌15 min備用。 ②臨用時加熱熔化瓊脂,趁熱加入乳糖,冷至50 ℃一55 ℃時,加入結晶紫相中性紅水溶液,搖勻后傾注平板。結晶紫及中性紅水溶液配好后須經高壓滅菌。 5、伊紅美藍瓊脂(EMB) 成分: 蛋白胨 ? ? ?10 g 乳糖 ? ? 10 g 磷酸氫二鉀 ? ? 2 g 瓊脂 ? ? ?17 g 2%伊紅Y溶液 ? ? ?20 mL 0.65%美藍溶液 ? ? 10 mL 蒸餾水 ? ? ? ?1000 mL pH ? ? ?7.1 制法: 將蛋白胨、磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,校正pH,分裝于燒瓶內,121 ℃高壓滅菌15 min備用。臨用時加入乳糖并加熱溶化瓊脂,冷至50 ℃一55 ℃,加入伊紅和美藍溶液,格搖勻,傾注平扳。 ? 6、三糖鐵瓊脂(TSI) 成分: 蛋白胨 ? ? 20 g 牛肉膏 ? ? 5 g 乳糖 ? ? 10 g 蔗糖 ? ? ?10 g 葡萄糖 ? ? 1 g 氯化鈉 ? ? ?5 g 硫酸亞鐵銨[Fe(NH4)2·(SO4)2·6H2O] ? ? 0.2 g 硫代硫酸鈉 ? ? 0.2 g 瓊脂 ? ? 12 g 酚紅 ? ? 0.025 g 蒸餾水 ? ? 1000 mL pH7.4 制法: 將除瓊脂和酌紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂,加入0.2 %酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝于試管內,裝量宜多些,以便得到較高的底層。l21 ℃高壓滅菌15 min,放置高層斜面備用。 7、克氏雙糖鐵瓊脂(KI) 上層培并基成分: 血消化湯(pH7.6) ? ? 500 mL 瓊脂 ? ? 6.5 g 硫代硫酸納 ? ? ?0.1 g 硫酸亞鐵銨 ? ? 0.1 g 乳糖 ? ? 5 g 0.3 %酚紅溶液 ? ? 5 mL 下層培養基成分: 血消化湯(pH7.6) ? ? 500 mL 瓊脂 ? ? 2 g 葡萄糖 ? ? 1 g 0.2%酚紅镕液 ? ? 5 mL 制法: ①取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量,分別加入瓊脂,加熱溶解。 ②分別加入其他各種成分。將上層培養基分裝于燒瓶內;將下層培養茬分裝于滅菌12 mm×100 mm試管內,每管約2 mL。115 ℃高壓滅菌10min。 ③將上層培養基放在56 ℃水浴箱內保溫;將下層培養基直立放在室溫內.使其凝固。 ④待下層培養基凝固后,以無菌操作將上層培養基分裝于下層培養基的上面,每管約1.5mL,放成斜面。 8、半固體瓊脂 成分: 蛋白胨 ? ? 10 g 牛肉膏 ? ? 3 g 氯化鈉 ? ?5 g 瓊脂 ? ? 4 g 蒸餾水 ? ? 1000 mL pH7.5 制法: 按以上成分配好,煮沸使溶解,并校正pH7.4-7.6加入瓊脂后趁熱過濾(若瓊脂無雜質可不過濾),分裝、包扎、標記,121 ℃滅菌15 min,取出直立凝固備用。 注:供動力觀察、菌種保存、H抗原位相變異等試驗用。

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