1、將適量的菌體懸浮于500μl溶菌酶溶液（2%）中，37℃溫育1hr 左右至完全溶菌，

2、加入500μl堿性SDS溶液（0.3mol/L NaOH, 2%SDS），立即振蕩混合完全，

3、打開管蓋，在70℃放置15min（對大于20kb的質粒則最好放在55℃， 30min），然后于水浴中冷卻至室溫，

4、加入100μl酸性苯酚/氯仿溶液，用混合器振蕩至液體徹底混合均勻，12000rpm離心5min,移取上清液，棄去白色中間層。

5、用中性苯酚/氯仿重復抽提直至看不見（或非常少）中間層為止。

6、在上清液中加入1/10體積的3M NaAc溶液和1倍體積的異丙醇沉淀5分鐘（或2.2倍體積的無水乙醇沉淀1h），12000rpm離心8min，

7、用70%乙醇洗滌沉淀兩次。

8、干燥后加一定量的TE（ddH2O）緩沖液溶解。

另：可使用抽提總DNA的試劑盒，將總DNA與質粒DNA一起抽提。