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  • 實驗方法> DNA實驗技術> DNA提取與純化>凍融法回收DNA片段

    凍融法回收DNA片段

    關鍵詞: 凍融法 回收 DNA片段來源: 互聯網

    1.? 紫外燈下仔細切下含待回收DNA的膠條,將切下的膠條(小于0.6g)搗碎,置于1.5ml離心管中;

    2.? 加入等體積的Tris-HCl飽和酚(pH 7.6),振蕩混勻;

    3.? -20℃放置5-10min;

    4.? 4℃離心10000g×5min,上層液轉移置另一離心管中;

    5.? 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,振蕩混勻;

    6.? -20℃,放置5-10min;

    7.? 4℃離心10000g×5min,合并上清液;

    8.? 用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次,取上清;

    9.? 加入1/10體積3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍體積預冷的無水乙醇,混勻;

    10. -20℃,靜置30min;

    11. 4℃離心13000g×10min,棄上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;

    12.? 加適量H2O或TE溶解沉淀。

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