(一) 鼠肝DNA的制備

原理

DNA是儲存遺傳信息的物質，是遺傳的物質基礎，它與生命的正常活動如種厲遺傳、生長發育有密切關系。其結構與功能的研究是當前分子生物學研究的主要內容之一。

核酸廣泛存在于生物中，DNA含有生物體的全部遺傳信息，在生物組織中以核蛋白(DNP)形式存在。真核生物中，DNA主要存在于細胞核中，核外也有少量，如線粒體DNA，稱為核外基因。DNA的分子長度一般隨生物由低級進化到高級而增加。人類含2.9×109bp。

無論是研究核酸的結構，還是它的功能，首先需要對核酸進行分離與提純。分離與提純核酸最基本的要求是保持核酸的完整性及純度。

要從生物組織中提取DNA，睱DNA是以核蛋白(DNP)形式存在于細胞核中故首先必須粉碎組織，裂解細胞膜和核膜，使DNP釋放出來，再用苯酚提取蛋白。由于細胞中的核糖核蛋白(RNP)和DNP往往一起被提取，故DNA沉淀中混有RNA。

需用核糖核酸酶(RNase)處理，去除RNA。并用蛋白酶將遺留的少量蛋白質水解除去，再經苯酚處理，乙醇沉淀，最后可得較為純凈的DNA。它的純度可以從260nm波長處的光密度和280nm波長處的光密度之比值測知，一般以O.D260nm/O.D280nm能達到1.8左右為標準。

分離與提純過程中保持DNA的完整性和純度存在許多困難，主要原因有：

(1)細胞內存在很高的DNA酶活性，在分離與提純過程中會造成核酸的降解。

(2)DNA分子很大，分離過程中因化學因素或物理因素使DNA降解，如強酸、強堿、溫度過高或機械張力剪切等。DNA的定量可采用化學的定磷法、定核酸法。目前多數實驗室采用紫外分光光度法測定核酸含量，以下公式可作為紫外定量時參考：雙鏈DNA含量：

O.D260nm×樣品稀釋倍數×50μg/ml=μg/m1樣品。

器材

1.塑料離心管：6

2.刻度離心管：1

3. 滴管：

長： 1 吸酚：氯仿混合液

中： 1 吸乙醇

短(鈍口) ： 1吸DNA水溶液

4.細玻棒：1

5.移液管：1

6.微量取樣器1

7.手套：1副

8.離心機

9.紫外分光光度計

10.37℃水浴，50℃水浴

11.組織搗碎器

12.電泳儀及電泳槽

試劑

1.裂解緩沖液：

50mmol/l Tris—Hcl pH7.4

20mmol/lEDTA、

0.5%SDS

100mmol/l NaCl