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  • 實驗方法> DNA實驗技術> DNA提取與純化>基因組DNA提取

    基因組DNA提取

    關鍵詞: 基因組 DNA 細菌 血液 動物 植物來源: 互聯網

    基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中,可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部,從而達到提取的目的。

    在提取過程中,染色體會發生機械斷裂,產生大小不同的片段,因此分離基因組DNA時應盡量在溫和的條件下操作,如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩,以保證得到較長的DNA。一般來說,構建基因組文庫,初始DNA長度必須在100kb以上,否則酶切后兩邊都帶合適末端的有效片段很少。而進行RFLP和PCR分析,DNA長度可短至50kb,在該長度以上,可保證酶切后產生RFLP片段(20kb以下),并可保證包含PCR所擴增的片段(一般2kb以下)。

    不同生物(植物、動物、微生物)的基因組DNA的提取方法有所不同;不同種類或同一種類的不同組織因其細胞結構及所含的成分不同,分離方法也有差異。在提取某種特殊組織的DNA時必須參照文獻和經驗建立相應的提取方法,以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖和酶類物質對隨后的酶切、PCR反應等有較強的抑制作用,因此用富含這類物質的材料提取基因組DNA時,應考慮除去多糖和酚類物質。

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