儀器用具： 微量離心機

藥品試劑：

Plasmid DNA 酵解產物： #1 （pBlueGus/HindIII）， #2 （pBlueGus/BamHI）；Phenol/chloroform/isoamyl alcohol （25:24:1） 以下簡稱為PCI;Chloroform/isoamyl alcohol （24:1） 以下簡稱為CI;3 M NaOAc （醋酸鈉pH 5.2）；純酒精及70%酒精

方法步驟：

◆ 注意！進行這一部份實驗的前，請先確定pBlueGus/HindIII 與pBlueGus/BamHI 兩者的酵解反應都已經完全。

1） 于酵解反應 #1 與 #2 的微量離心管分別加入182 μL 去離子水。

2） 以200 μL PCI 萃取一次，亦即加入PCI 后，以Vortex 震蕩混合，并在室溫離心3 min。

3） 以微量移液器P200 將上層液移至新的微量離心管。

4） 加入等體積的CI,以Vortex 充分震蕩混合，并在室溫離心3 min。

5） 以微量移液器P200 將上層液移至新的微量離心管。

6） 加入0.1 倍體積的3 M NaOAc （pH 5.2） 及2.5 倍體積絕對酒精。

7） 置于 -20℃過夜，或于 -80℃放置30 min，以便沉淀DNA.

隔天：

1） 自冷凍柜取出微量離心管，以14,000 rpm 離心10 min。

注意： 請利用這一段時間參照『基本操作技術』所描述的步驟準備一片1.2%洋菜膠體。 Ethidium bromide 是一種強力致癌物質，嚴禁戴著手套到處亂摸！

2） 小心地倒出上清液。

3） 徐徐加入0.5 mL的70%酒精 （預先放在 -20℃預冷）。小心不要動到DNA沈淀。

4） 以14,000 rpm 低溫離心5 min 的后，倒去上清液，并將微量離心管倒置于一張干凈的衛生紙上30 min,以便風干DNA.也可以用SpeedVac 干燥DNA,但應小心處理，以免DNA 沉淀不見了。

5） 以10 μL dH 2 O/DEPC溶解DNA。

6） 依照下表，自pBlueGus/BamHI 與pBlueGus/HindIII 各取1 μL DNA 以洋菜膠體電泳進行分析，并估算其濃度。

DNA 濃度的估算請以 DNA/HindIII 量為參考值