透射免疫比濁法和速率散射免疫比濁法測定C反應蛋白的比較

【摘　要】目的：評估透射免疫比濁法和速率散射比濁法檢測C反應蛋白(CRP)的靈敏度和特異性。方法：用免疫透射比濁法和速率散射比濁法同時檢測了80例各種患者血清中CRP濃度。結果：兩種方法在8—20mg／L、20～40mg／L、40～80mg／L、80～160mg／L、160～300mg／L范圍內測定C反應蛋白的相關系數是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997．說明兩種方法的相關性是良好的，而在低值1～8mg／L的測定中兩方法的相關系數為0．928．結論：速率散射免疫比濁法在低值和高值測定中可以得到較為準確的CRP檢測結果。

【關鍵詞】透射免疫比濁法 散射免疫比濁法 C反應蛋白

在急性應急性疾病時如大手術、重度創傷、心肌梗死、嚴重感染、腫瘤等，血漿中某些蛋白濃度可明顯增高或降低，這種現象稱為急性時相反應，這些蛋白統稱為急性時相反應蛋白。最具有代表性的急性時相蛋白首推C反應蛋白(CRP)，CRP是目前臨床上最有用的急性時相反應的一個敏感指標。

CRP作為炎癥標志物，本身盡管為非特異性的，但對于細菌感染、各種炎癥過程及組織壞死與損傷及其恢復期的篩檢、監測、病情評估與療效判斷，都具有重要的意義J。CRP的檢測方法目前使用比較多的有膠乳凝集試驗、免疫沉淀法、免疫濁度法和標記免疫測定法等，而其中的透射免疫比濁法和速率散射比濁法是目前公認為檢測CRP較為精確的兩種方法。為了評估兩種方法的靈敏度和特異性，我們收集了80份血清，用免疫透射比濁法和速率散射比濁法分別進行CRP的檢測，并作了結果比較。

一、材料與方法

1、標本來源

樣本血清來源于80例本院門診和住院病人，其中骨折病員21例，確診的惡性腫瘤病人15例，急性肺炎病員22例，冠心病病人10例，外科手術病員12例。采集空腹血后及時分離血清，并置-20℃保存備用。

2、儀器

日立7170型自動生化分析儀，BeckmanArray 360特定蛋白檢測系統。

3、試劑

透射免疫比濁法試劑盒及配套的校準品由上海基恩科技有限公司提供，批號為ISEP03。速率散射免疫比濁法：Beckman公司提供的C反應蛋白試劑及C反應蛋白定標卡，定標液，批號為M2070527。

4、方法

（1）免疫透射比濁法將標準品稀釋配制成5個不同濃度的標準品--10mg／L、19mg／L、38mg／L、76mg／L、162mg／L，進行5點定標，形成標準曲線。樣本為20 uL，試劑1為180 uL，，試劑2為35uL，吸光度為340nm，5分鐘后進行透射比濁。

（2）速率散射免疫比濁法將該公司配備的定

標卡進行校準，樣本量為200l，試劑量為50，0．5分鐘完成比濁測定。

5、統計方法

檢驗結果以x±s表示，以SPSS10．0軟件包中Studentt檢驗作統計學處理。

二、討論

人體CRP與相應的抗血清在液相中反應，生成抗原抗體復合物，并產生濁度，其濁度的高低與標本中的CRP濃度呈正比，根據標準曲線，即可計算出標本中的CRP的濃度，這是透射免疫比濁法的測定原理[4]。速率散射免疫比濁法是一種抗原抗體結合反應的動態測定法J，將各單位時間內CRP與抗血清形成復合物的速率及復合物顆粒產生的散射信號連接在一起，即形成動態動力學的速率散射免疫比濁法。

實驗結果表明，兩種方法在8～20mg／L、20～40mg／L，40～80mg／L，80～160mg／L，160～300mg／L范圍內測定C反應蛋白的相關系數是0．990、0．996、0．995、0．992、0．997，說明兩種方法的相關性是良好的。而在低值1～8mg／L的測定中兩方法的相關系數為0．928，由于在透射免疫比濁法檢測中，如果抗原抗體復合物的數量太少，對光通量的影響不大，如果復合物分子太小則阻擋不了光線的通過，在低濃度的C反應蛋白血清測定中會有所影響。而速率散射免疫比濁法是以測定單位時間內抗原抗體反應復合物形成的最快時間段的信號值，產生的散射信號最強，形成最大速率散射信號峰值。

理論上講，該測定不受本底散射信號的干擾，使檢測快速，靈敏度高，對檢測微量的C反應蛋白比較理想[6]。在高濃度的C反應蛋白測定中，由于抗原過量，透射比濁法測定時，CRP濃度明顯超出了檢出限上限，發生測定結果顯著低于實際含量。而在速率散射免疫比濁分析中，為保證準確性和精確度，儀器設計有抗原過量檢測系統，提示應將待測樣本進一步稀釋，重新進行檢測，以獲取全部抗原的真實濃度。由此看來，在比較試驗中，速率散射免疫比濁法在低值和高值測定中可以得到較為準確的結果。

目前已有測定超敏CRP的免疫增強透射比濁法在日立7170A生化分析儀上的應用的報道，其檢測范圍在0．125～12．5mg／L，具有更高的靈敏度，可以參考推廣應用。

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