酵母蛋白的提取方法

1 準備SD/-Leu或是YPD 培養基20ml，酵母過夜培養，30℃，230rpm。 2 測OD600 約1.0。 3 100ml過夜培養物，1000g，離心，5min，4℃。 4 棄上清，重懸于80ul抽提buffer： 0.1M Tris-Cl（PH7.5），0.2M NaCl，0.01Mβ-ME，20％甘油，5mM EDTA，1mM PMSF。(100×)：PMSF 0.1742g 溶于10ml 異戊醇（主要抑制絲氨酸蛋白激酶）， RT保存。 5 轉移上清到一預冷的玻璃管中，再加入玻璃珠33ul（425-600um）。冰上操作，渦流10min，但不包括樣品的預冷時間。 6 回收玻璃珠，并盡可能取上清到另一預冷的玻璃管中。 7 40ul的抽提buffer，同上渦流。 8離心后分離上清（回收玻璃珠）。 9液氮快速冷凍，-70℃儲存。 10 提取的蛋白量通常約10-20mg/ml, 2-5ul用于實驗。