除了抗體原因，轉膜恐怕是western blot成敗的最關鍵因素。

園子里好多好多人在求助轉膜時間，因此我們總結了一系列分子量蛋白轉膜的時間，希望對大家有用。 蛋白來源：RAW264.7 總蛋白 蛋白名稱（可保密）：一些轉錄因子 蛋白分子量：40~70 KD WB用膜類型、孔徑：0.45 NC 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒流400 mA 轉膜時間：60~90 min PS.其實吧，以我的經驗來看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉膜時間真的不是那么重要，曾經因為失誤，轉了15 min就拆下來了，但從麗春紅染色來看，跟平常實驗也沒有太大的區別。 蛋白來源：內皮細胞 總蛋白 蛋白名稱（可保密）：occludin & AKT 蛋白分子量：65 KD & 56 KD WB用膜類型、孔徑：0.45 PVDF 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 100 V 轉膜時間：60~70 min 設備名字是“Bio-Rad mini”。 蛋白來源：乳鼠心肌細胞和成年鼠心肌組織 總蛋白和核蛋白 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：65 KD & 55 KD WB用膜類型、孔徑：PVDF（預先用甲醇處理） 轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉 恒壓 12 V 轉膜時間：30-40 min 設備：“Bio-Rad mini” 建議：最開始做過濕轉（過夜的那種），太費事費時，效果也不如半干轉。 蛋白來源：293T細胞 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：95 KD & 35 KD WB用膜類型、孔徑：PVDF 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓 90 V-110 V，控制電流不要超過300 mA。 轉膜時間：70 min 蛋白來源：腫瘤手術標本 蛋白名稱（可保密）：轉錄因子 蛋白分子量：33 KDa WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流 轉膜時間：150 min 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad 說明：相同條件曾用于數個30-70 KDa的蛋白，都能成功轉上，不過沒有試縮短時間效果如何；實驗時沒為轉膜條件苦惱，倒是電泳時膠的濃度及時間根據不同分子量而有區別。 蛋白來源：成纖維細胞 蛋白名稱（可保密）：smad3 蛋白分子量：54 KDa WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉膜方式（恒壓、恒流）：350 mA 恒流 轉膜時間：150 min 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad 蛋白來源：胰腺癌細胞 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉膜方式（恒壓、恒流）：120 V 恒壓 轉膜時間：90 min 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad 蛋白來源：大鼠血管平滑肌細胞 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD WB用膜類型、孔徑：一般的PVDF膜 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流一張膜0.26 A，兩張膜0.3 A。 轉膜時間：90 min 設備：“Bio-Rad mini” 建議：轉膜緩沖液最多用3次，最好現用現配，我們用的沒有加SDS，轉的時候最好能用冰塊一類的東西降一下溫，這樣轉的效果要好一些，轉的時候一定要把三明治每層之間的氣泡除去，同時使濾紙大于膜，膜大于膠，以免燒壞電極。 蛋白來源：大鼠PBMC 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：55 KD WB用膜類型、孔徑：0.22的PVDF膜 轉膜方式（恒流）：濕轉 轉膜時間：60-90 min 設備：“Bio-Rad mini” 建議：轉膜液用過兩三次之后轉膜效果就很差了 其它按照常規就好了 其實0.22的膜一般不怕轉過頭 以我們的經驗，轉膜時間、電壓其實也有很大范圍的調整 ，并不是非要固定于哪一個最合適，曾經做過 一張膜轉，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的條件，17 KD的轉膜也很好的。 蛋白來源：人非小細胞肺癌細胞系 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：大于250 kD WB用膜類型、孔徑：millipore PVDF膜 0.45 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉，恒流0.3A。 轉膜時間：180min 設備：“Bio-Rad ” 建議：電轉保持電壓在70 V以上，保持低溫，如果電壓低過70就需要換緩沖液了。

蛋白來源：白血病細胞 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：28 KD WB用膜類型、孔徑：0.45的NC膜 轉膜方式（恒流）：濕轉，90 min，0.25 A 設備：“Bio-Rad ” 建議：海綿厚度要合適，一次轉磨用的海綿太薄，導致三明治沒夾緊，轉膜后拿出來一看，marker都變得七扭八歪。但是有前輩說墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒經歷過，不知道是不是會有這種情況。 蛋白來源：腫瘤細胞 蛋白名稱（可保密）：磷酸化蛋白 蛋白分子量：10-200 KDa WB用膜類型、孔徑：millipore PVDF膜 0.45 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：120 v 恒壓 轉膜時間：120 min 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad

建議：轉膜緩沖液只用2次，基本都轉上，5%BSA封閉，減少背景。

蛋白來源：胰腺β細胞 蛋白名稱（可保密）：****** 蛋白分子量：90-130 KDa WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 轉膜方式（恒壓、恒流）：250 mA 恒流 轉膜時間：150 min

轉膜設備：濕轉

蛋白來源：原核表達 蛋白名稱（可保密）：保密 蛋白分子量：38 KD WB用膜類型、孔徑：0.45 NC 轉膜方式（恒壓、恒流）：濕轉 恒壓：100 V

轉膜時間：120 min

蛋白來源：心臟 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa WB用膜類型、孔徑：PVDF 轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉膜時間：70 v120 min，180 min，5-6 h 轉膜設備：伯樂濕轉 建議改進方向（可選）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足夠，40-70 kDa 90-120 min即可。

70-120 kDa ，70 v，120-180 min足夠，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建議6 h。

蛋白來源：卵巢癌細胞膜蛋白 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：53 KD WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉膜時間：80 V 100 min

轉膜設備：濕轉 Bio-Rad

蛋白來源：人宮頸癌HELA細胞總蛋白 蛋白名稱（可保密）：β-actin 蛋白分子量：42 WB用膜類型、孔徑：PVDF膜 0.45 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉膜時間：50 4 h 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad 蛋白來源：腦組織 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：16 KD、27 KD、32 KD、42 KD WB用膜類型、孔徑：PVDF 0.22 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：半干轉 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2 轉膜時間：不定 轉膜設備：北京六一儀器 建議：我共做了六個蛋白，所以總在想節約時間的方式。

在預試時我會觀察電壓數與轉膜效率的關系，所以我不會按時間來定何時轉完，而是按電壓來定。通過染膠來確定電壓數與轉移蛋白分子量上限的關系。這樣有的5分鐘就轉完了，不用多浪費時間。并且六一的半干轉膜儀隨著使用次數的增多，效率也會下降，所以時間和轉膜效率（尤其是使用后期）的關系并不穩定，單純依靠時間有時會有問題。

蛋白來源：CHO cell 蛋白名稱（可保密）：酶原 蛋白分子量：40 KD WB用膜類型、孔徑：0.22的PVDF膜（Biorad） 轉膜方式（恒壓）：100 V，濕轉，轉膜時間：60 min。 設備：Tanon（上海天能） 建議： 1. 轉膜液現用現配，用完倒掉。

2. 轉膜時間，電壓可以適當調整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此條件一樣轉膜效率很高。

蛋白來源：Hepg2 蛋白名稱（可保密）：EGFR 蛋白分子量：170kd WB用膜類型、孔徑：pvdf 0.45 轉膜方式（恒壓、恒流）：24V 轉膜時間：2個半小時 轉膜設備：伯樂半干轉 蛋白來源：肝癌細胞 蛋白名稱：HIF-1α 蛋白分子量：120 kD WB用膜類型、孔徑：NC膜 轉膜方式（恒壓）：80伏，濕轉 轉膜時間：150分鐘 設備：“Bio-Rad mini”

建議：濕轉，轉膜液特別重要，否則會導致電壓或者電流不穩影響轉膜條帶。轉膜均現配先用，不重復利用。轉膜時間一般是150分鐘，80伏恒壓。經李春紅染色，靠近蛋白膠的一側膜上蛋白染色深，膜另外一面染色淺，說明蛋白未轉過。該濕轉條件自己做過的蛋白分子量范圍：170-36 kD。

蛋白來源：心肌細胞總和膜 蛋白名稱（可保密）： 蛋白分子量：128 KD，100，60，55，43 KD WB用膜類型、孔徑：NC膜 0.2 um 轉膜方式（恒壓、恒流）：恒壓 轉膜時間：70 V 200 min 轉膜設備：濕轉 Bio-Rad 建議：轉膜液最好現配現現用，或配成母液，最好不重復使用，70 V電壓下，電流約154 mA。甲醇可以加到150 ml。對大分子量如200 KD轉膜時間延長6-8 h。