聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)實驗方法改進
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)實驗方法總匯
改進一:配膠
背景:在配制SDS-PAGE 膠的時候,加入分離膠的過程中常常會帶入氣泡,即使用雙蒸水來壓平界面也有可能因為力度不勻而導致膠面不夠齊平,最后使跑出來的相同大小的蛋白條帶不在同一個水平面上。
方法改進:所做的改進很簡單卻很有效,加完分離膠后,用移液槍吸取酒精(濃度沒有特別要求,干凈無污染就好)加到分離膠上至覆蓋界面,靜置片刻后放到37℃恒溫箱中可加速膠的凝固。待到分離膠完全凝固之后倒去上層的酒精,就可以看到齊平漂亮的界面啦!
改進二:脫色
背景:給染色結束的SDS-PAGE 膠脫色往往需要比較長的時間,否則會由于脫色不完全而導致條帶不清晰,影響到拍照的效果。
方法改進:改進的方法很簡單易行——取一張我們常常隨身攜帶的面巾紙,打個結放入盛有脫色液的大培養皿里放到脫色搖床上,這樣一來,原來過夜脫色達到的效果現在只需要短短的3、4個小時就可以輕松實現了。
PS:希望大家這個時候用的面巾紙是質量比較好不容易掉屑的...
改進三:如何方便地取出SDS-PAGE 膠?
背景:在跑完SDS-PAGE 后,取膠通常是一個問題,由于膠和玻璃貼的比較緊,一不小心就可能把玻璃板弄壞。將膠從玻板上取下的時候膠也很容易碎掉。
方法改進:用流水沖玻璃板的縫隙處(也就是凝膠部分),一邊沖一邊輕輕掀起玻板,用水去充滿玻板和膠之間的縫隙,很容易能把玻板掀開。接下來把玻板反過來,讓膠面朝下,使其一端浸入到一個盛著水的大平皿中,輕輕晃動,膠很快就會被水帶到平皿中了,絲毫不會損傷膠。
這個方法非常簡單,下次你也可以試試哦。