關于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題

生物實驗中的封閉劑

Q：western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?

A：脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原 的蛋白去封閉膜，避免標記抗體固定在膜上引起背景增高。

Q：請問封閉液和抗體稀釋液用BSA 和脫脂奶粉有什么區別呢?

有人跟我說奶粉的封閉效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果要做ELISA或者phage display時候，蛋白鋪板的話，不能使用脫脂奶粉。可是也有人說可以，請問是否有這個說法呢?

A：所謂封閉是用以減少或消除載體 上的非特異性結合蛋白的分子，一般是脫脂奶粉或BSA.對WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠較BSA復雜，如果要做ELISA或者phage display時候，我們還是用BSA,有關的操作手冊上也是如此。 我推測也沒有依據說脫脂奶粉就絕對不能用，注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質量不同， 脂質是會影響實驗結果的，即使是用于WesterBlot也要有所挑選， 有興趣可以試試，但是不要在正式實驗時試。

Q：請問大家，封閉的時候，為什么一定要用脫脂奶粉?

A：膜上有蛋白缺損點，不用蛋白封蛋白缺損點容易出現非特異染色。

也可用BSA 封，效果并不比脫脂奶粉好。