免疫血清的制備及免疫球蛋白的提取 ? 實驗題目 ：免疫血清的制備及免疫球蛋白的提取 教 ? 師：XXX 實驗類型： 基礎 學　　時 ：12(參考) 內　　容 ： 一、實驗目的 ： 1.理解免疫血清的來源及主要成份。 2.掌握制備抗特定抗原的動物抗血清的方法。 3.掌握免疫球蛋白的提取過程。 二、實驗原理 ： 免疫血清的制備是利用動物，有目的地生產某種抗體，通過這種方法得到的抗體是多克隆抗體，可用于體外的抗原抗體反應。 通過對正常健康兔子免疫注射通過免疫佐劑處理的外源抗原，多次免疫后使兔子產生針對此抗原的特異性抗體，通過離心得到的血清就是抗特定抗原的動物抗血清。 硫酸氨分級沉淀后使用陰離子交換柱純化出來免疫球蛋白。 三、試劑與器材 ： 1.實驗動物：兔子 2.抗原：（小牛血清） 3.佐劑：福氏完全佐劑 4.乳化攪拌器 5.注射器及針頭 6.手術器械：剪刀，手術刀，線，血管鉗，塑料導管 7.離心機及離心管 8.三角瓶 9.酒精棉球 10. Na2 N3 四、操作方法： 1.免疫血清制備： 選擇動物→免疫原→免疫途徑、劑量和次數→應用佐劑→免疫血清效價測定→采血→分離血清→保存免疫血清 2.IgG的提取： 制備的免疫血清→飽和硫酸銨沉淀→離心→冷鹽水溶解→透析→脫鹽→DEAE纖維素層析→樣品收集→IgG鑒定 五、關鍵步驟與注意事項： 1.對實驗動物進行免疫時，抗原量不要一次加的過多，要少量多次注射。 2.向制備的免疫血清中加入飽和硫酸銨時要緩慢逐滴加入。 3.DEAE纖維素層析柱平衡至少要24小時以上。 六、思考題： 1.免疫佐劑處理外源抗原對實驗動物免疫時需要注意哪些方面才能保證最終獲得的抗血清的活性最高？2.免疫血清要是需要長時間保存需要注意哪些問題？

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