電泳技術及其應用

一：電泳（Electrophoresis）：帶電粒子在直流電場中向著所帶電性相反的電極移動的現象。 電泳分析技術：利用電泳現象進行物質分離的技術。 二：影響電泳的因素： 1． 帶電粒子的帶電狀態（電量和電性）。 2． 帶電粒子的分子量大小和分子形狀。 3． 電場強度。 4． 緩沖液的PH 值，組成成分及離子強度。 5． 支持介質的吸附和電滲作用。 三：蛋白質電泳的機理 1． 蛋白質是兩性電解質： 當 PH=PI 時，所帶凈電荷為零；當 PH>PI 時，所帶凈電荷為負；當 PH<PI 時，所帶凈電荷為正；當 PH 距離PI 越遠時，所帶電量越多。 2． 不同蛋白質等電點不同，在同一緩沖液中所帶電性及電量不同，電泳時遷移的方向和速率不同。 3． 不同蛋白質分子量大小和分子形狀不同，故遷移率不同。 四：實驗：血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳 （一） 原理： 1． 人血清蛋白質的分類，等電點，分子量及遷移率： 2． 在PH8.6 的緩沖液中均帶負電，泳向正極。 3． 染色漂洗后，可見5 條帶（定性）。 4．洗脫比色后可定量（今天不做）。 （二） 器材和 試劑 ： 1． 電泳儀 2. 電泳槽 3. 載波片，點樣器，鑷子 4. 染缸 5. 醋纖膜 6. 巴比妥緩沖液 7. 氨基黑染液 8. 漂洗液 （三） 操作： 1． 準備： 1） 將緩沖液倒于電泳槽中（每池約500ml）。 2） 將醋纖膜浸泡在緩沖液中20min。 3） 每人取一張醋纖膜（用鑷子夾取），用濾紙吸干水分，找到粗糙面，在距一端2cm 處劃點樣線，用鉛筆或圓珠筆寫上學號。 2． 加樣：用加樣器加樣；取樣要適量、均勻（點樣器下端均勻沾有一層 血清 即可）；點樣于劃線處，點樣 時用力要均勻，只能點一次。 3． 上橋：粗糙面向下，點樣端位于負極。紗布搭橋。 4． 平衡：蓋上蓋子，靜置5min。 5． 電泳：120V，電泳45min（電泳使不得用手觸摸電泳槽內任何物品，以防觸電）。 6． 染色和漂洗：染色5min；初漂、次漂各2min：用鑷 子夾拄醋纖膜輕輕搖動，或輕輕晃動染缸。 7． 定量：剪下各條帶，洗脫，比色。（不做） （四） 結果：參見原理。 （五） 臨床意義： 1． 白蛋白降低： 1） 合成能力不足：肝功能下降。 2） 合成原料不足：饑餓，腹瀉，腫瘤晚期。 3） 去路增加：腎病綜合癥，嚴重燒傷，大出血等。 4） 消耗過多：糖尿病，甲亢等 2． 球蛋白增加：感染，多發性骨髓瘤，自身免疫性疾病等。 3． 球蛋白降低：皮質功能亢進，免疫缺陷病。 4． 肝病時：A ,α2-G ,β- G ,α1- G , γ- G A/G下降甚至倒置。 5． 腎病時： 1） 早期：選擇性蛋白尿：分子量較小的蛋白質丟失，含量下降。如白蛋白。 2） 后期：非選擇性蛋白尿：除分子量較小的蛋白質丟失，含量下降外，分子量較大的蛋白質（如γ- 球蛋白）也丟失，含量也下降。

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