瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA

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【實驗目的 】 通過實驗掌握瓊脂 糖凝膠電泳鑒定DNA的原理與方法。 【實驗原理 】 瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種雜聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷鍵相連形成的線狀高聚物（如下圖所示）。瓊脂糖遇冷水膨脹，溶于熱水成溶膠，冷卻后成為孔徑范圍從50nm到大于200nm的凝膠。 瓊脂糖凝膠電泳 是分離、鑒定和純化DNA片段最為常用的方法之一，這種方法簡便易行。而且瓊脂糖可以灌制成各種形狀、大小和孔徑，在不同的裝置中進行電泳，如果有必要，還能夠從凝膠中回收DNA譜帶。 瓊脂糖凝膠的分離范圍較廣，選擇不同凝膠濃度和裝置，從50個堿基對到幾兆不同長度的DNA都可以實現分離。使用電場強度和電泳方向恒定的水平板瓊脂糖凝膠電泳的方法，可以很好的分離長度在50-20,000 bp 的DNA片段。 DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移率受多種因素影響。例如DNA分子 的大小；瓊脂糖的濃度；所加電壓等等。DNA片段越長，泳動速度越慢，而且泳動速度與電場強度成正比。一個給定大小的線性DNA片段，在不同濃度的瓊脂糖凝膠中遷移率不同，DNA電泳遷移率的對數與凝膠濃度成線性關系。 用低濃度的熒光染料如溴化乙啶染色后，凝膠中的DNA可以直接被檢測出來。紫外燈下可以直接檢測到20pg的雙鏈DNA。 【實驗材料 】 1. 實驗器材 水平板電泳槽；灌膠模具及梳齒；電泳儀；55℃水浴；沸水浴；微量移液器 2.實驗試劑 （1）DNA樣品；DNA標準分子量標記物；瓊脂糖；1x電泳緩沖液TBE；6x樣品緩沖液 （2）溴化乙錠：水中加入溴化乙啶，攪拌數小時至溶解。將配好的10 mg/ml溴化乙啶溶液裝在棕色瓶中，室溫保存，使用時稀釋至0.5μg/ml。 緩沖溶液配制表

緩沖溶液

工作溶液

儲存溶液（每升）

TBE

0.5x

5x

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0.045mol/L Tris-硼酸

54 g Tris 堿

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0.001mol/L EDTA

27.5g 硼酸

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20ml 0.5mol/L EDTA (pH8.0)

6x樣品緩沖液

0.2% 溴酚藍

儲存溫度4℃

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50% (w/v) 蔗糖水液

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