一、試驗原理

細菌在葡萄糖代謝中生成丙酮酸，從丙酮酸開始，隨細菌種類不同而有多種分解途徑，有的使丙酮酸進一步分解，生成甲酸、乙酸、乳酸等終產物，有的可以使丙酮酸脫羧變為中性最終產物乙酰甲基甲醇（Acetylmethyl carbinol），亦稱 3-羧基丁酮（Acetoin）。本試驗即為檢查某些細菌在葡萄糖代謝中是否產生乙酰甲基甲醇，作為鑒定依據。

乙酰甲基甲醇在堿性環境中可被空氣中的氧氣氧化為丁二酮（Diacetyl），丁二酮與蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，即為 V-P 試驗陽性。

肌酸或肌酸酐可供給比精氨酸更多的胍基，故有加快 V-P 試驗出現陽性反應的作用。

不加α-萘酚，至少要有 10PPm 的丁二酮才能出現陽性，加入α-萘酚可使 V-P 試驗的靈敏度提高約 50 倍而不降低試驗的特異性，其酒精液還有增強顏色的作用。在試驗中，必須先加入α-萘酚，使其先與丁二酮和胍基復合物結合，然后才能加入 40% 氫氧化鉀溶液，加入量不得超過 0.2 ml。

若加入次序顛倒，氫氧化鉀可與蛋白胨某些成分反應產生橙紅色而造成假陽性。氫氧化鉀作為氧化劑可加速乙酰甲基甲醇氧化為丁二酮，并有助于二氧化碳的吸收。

二、試驗結果判斷

三、注意事項

牛肉浸湯不能用于本試驗，因在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮以及其它干擾試驗的物質，可造成假陽性。

V-P 試驗陽性菌偶爾也會不出現陽性反應，為避免這種情況，可將加有試劑的培養物于 50℃ 左右輕微加熱，陽性菌即出現紅色，而真正陰性菌仍保持原色。

在通用培養基中，一般培養 1-3 天多數能出現陽性反應，培養時間過長，可因產酸而使 V-P 反應減弱或造成假陰性。

一般來說，V-P 試驗和甲基紅試驗多呈相反結果。但應注意，這也不是絕對的，有少數細菌如蜂房哈夫尼亞菌（Hafnia alvei）和奇異變形桿菌有時兩試驗均出現陽性反應。

本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽孢桿菌和葡萄球菌等其它細菌時，通用培養基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基甲醇的產生，故應省去或以氯化鈉代替。

關于 V-P 試驗培養物的培養溫度，一般多采用 35℃ 或 37℃，但日本有學者認為 37℃ 培養常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性，故主張采用 28-30℃ 培養，夏季可培養于室溫。已知有少數細菌，如哈夫尼亞腸桿菌，在 37℃ 培養的 V-P 試驗結果常不穩定，需在 25-30℃ 培養，才能獲得可靠結果。

作者：許英俊

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