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試劑:? 試樣20μl??? DNA ladder??? 瓊脂糖?? TAE緩沖液?? 上樣緩沖液

含0.5μg/ml EB的電泳緩沖液

50×TAE貯存液:?? Tris??????????????????? 242g

冰乙酸????????????????? 57.1ml

0.5mol/LEDTA(pH 8.0)??? 100ml

雙蒸水???????????????? 至1L

1×TAE 工作液:? 40mmol/L??? Tris-乙酸鹽

1mmol/L???? EDTA

0.8%瓊脂糖凝膠:??? 瓊脂糖???? 0.8g

TAE???? 100ml

器械? 250ml錐形瓶+紙蓋子+棉線繩? 50ml量筒? 白槍頭 30μl槍? 5μl槍

微波爐 電泳儀(梳子,制膠板)? 凝膠成像儀

準備

1.? 250ml錐形瓶,超生清洗,烘干.

2.? 打開電子天平,預熱.

3.? 清洗制膠板,梳子,電泳槽.

步驟

1.? 按配方配制TAE.

2.? 250ml錐形瓶中,按配方加入瓊脂糖和TAE,搖勻.? (60ml+0.48g)

用棉線繩扎緊紙蓋子,蓋子上要扎眼透氣.緩沖液體積要小于容器體積的50%.

3.? 微波爐,中火加熱,不停觀察,最短時間內,至瓊脂糖完全融化.

4.? 待膠稍冷,約60℃,倒入制膠板中.厚度3-5mm.

5.? 插入梳子.梳子應在地面上0.5-1mm.

6.? rt,30-45min.凝膠完全凝結.

7.? 倒入少量電泳緩沖液在凝膠頂部,小心拔出梳子.到處緩沖液.將凝膠放入電泳槽中.

8.? 向電泳槽中加入緩沖液,剛好沒過凝膠1mm.

9.? 取約5μl上樣緩沖液,與20μl試樣/DNA ladder,分別混合均勻.

10.? 將上述混合液,加至加樣孔中. DNA ladder應在最左/右側.

11.? 關上電泳槽蓋,接好電源.使DNA從負極(黑)向陽極(紅)移動.

12.? 給予60-70V電壓.? (1-5V/cm)

13.? 待緩沖液前延至膠的2/3時,關閉電源,拔出電極插頭,打開電泳槽蓋.

14.? 小心取出凝膠,放入0.5μg/ml的EB液中,浸染30min.

15.? 于凝膠成像儀,312nm,觀察,攝像.

注意:

1. 配膠和灌滿電泳槽要使用同一批緩沖液.因為離子強度或pH很小的差別也會在凝膠前部產生紊亂,嚴重影響DNA泳動.

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