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REPLI-g Cell WGA & WTA Kit 試劑盒

價格：

品牌：QIAGEN 產地：德國型號： 4-6 樣本：來電或留言獲取樣本

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產地類別：進口

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詳細介紹

REPLI-g Cell WGA WTA Kit 試劑盒從細胞和有限的樣本中同時擴增全基因組和全轉錄組

同時擴增基因組DNA和RNA（總RNA或富集mRNA）
基因組狀態與轉錄模式輕松關聯
MDA技術實現了無偏差的擴增
直接從細胞或組織中擴增gDNA和RNA
適用于包括NGS在內的所有下游應用

REPLI-G Cell WGA & WTA Kit是能夠同時均一地擴增全基因組擴增和全轉錄組的產品，并且使得基因組與來源于非常小量樣本（25–1000個細胞）的轉錄組具有直接相關性。專用的緩沖液和試劑經過獨特的、可控的凈化步驟處理，避免REPLI-g擴增污染核酸。創新的裂解液可以有效地穩定細胞核酸，從而確保基因組DNA和RNA水平準確表現。基因組DNA和總RNA或mRNA（poly A +）的無偏差擴增采用創新的多重置換擴增（MDA）技術和新穎的REPLI-g SensiPhi DNA聚合酶來實現。不同于基于PCR的擴增技術，MDA具有增加高達1000倍的高保真率，避免了假陽性或陰性結果出現。

性能

完整覆蓋基因組和轉錄組，實驗可靠

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit包含新穎的REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase，以及用于從25–1000個細胞或相當量的樣本中同時擴增全基因組擴增和全轉錄組的優化緩沖液和試劑。經過高效的細胞裂解后，（徹底去除基因組DNA，之后進行靈敏的逆轉錄），該試劑盒采用多重置換擴增（MDA）技術完整地、無偏差地擴增基因組DNA和cDNA。擴增的gDNA和cDNA可以在各種下游應用中使用。

適用于多種研究領域

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit 可以直接從細胞中有效擴增gDNA和cDNA，并且可以與經常在臨床研究分析中出現的各種樣本一起使用，包括腫瘤細胞、干細胞、分選細胞或其它小量樣本（參見下表）。

樣本材料和研究領域的廣泛性
樣本材料（細胞或總RNA）	研究領域
癌癥	體細胞遺傳變異分析
腫瘤惡化
腫瘤干細胞/進化
腫瘤的異質性
體細胞遺傳變異分析
人/動物	生物標記物研究（SNP、突變、CNV）
嵌合體的研究
干細胞研究
遺傳易感性研究

原理

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit專門用來從少量樣本中同時擴增基因組DNA和總RNA，可實現基因組與轉錄組直接關聯。轉錄調節受基因組對環境的反應所驅動。基因組中的突變和變異，例如點突變和拷貝數或結構的變化，會導致各種物種內或生物體內（例如，嵌合體組織和癌癥）形成不同基因組。部分基因組變異可能對細胞或機體調節具有較低影響力。其他變異則可能對轉錄調節具有很大的影響并最終反映到生理機能上。由于組織的復合結構，對轉錄本基因型變化的直接結果分析只能通過那些由相同細胞組成的非常小量的樣本進行。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit可以對整個基因組和轉錄組進行高度均一的擴增，并且序列偏差可以忽略不計。本試劑采用多重置換擴增（MDA）技術，該技術利用一種可復制高達70 kb的片段而無需解離DNA模板的獨特的、連續DNA聚合酶進行gDNA/cDNA恒溫擴增。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit獨特的構成

所有的試劑酶和擴增組分都經過獨特的、可控的凈化步驟處理，以確保消除REPLI-g擴增污染DNA或RNA。之后則對試劑進行嚴格的質量控制，以確保其具有完整的功能。
獨特的裂解液可以有效地穩定細胞RNA和DNA。這確保了所產生的RNA能準確地反映體內基因表達圖譜，同時保持RNA和DNA的完整性，以便進行最大覆蓋度的基因組分析。
所有的酶促步驟已經過專門開發，能夠有效地處理RNA或DNA，從而準確地擴增。例如，這些步驟中包括了在合成RNA擴增所需的cDNA之前有效去除gDNA，以及確保DNA有效擴增的酶促DNA制備。
新穎的REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase可以用于多重置換擴增。它是新開發的高親和力酶，可以更有效地結合DNA，特別是在DNA濃度在反應混合物中較低時。此外，對比基于PCR的方法，REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase具有較強的校對活性，可以將錯配率減少1000倍。它還具有很強的鏈置換活性，通過穩定的發夾結構使DNA得以復制，該結構對以Taq酶為基礎的全基因組和全轉錄本擴增步驟具有抗性。

流程

遺傳分析往往需要大量的gDNA和cDNA，這對經常遇到的樣本量少是個挑戰。無法對少量樣本進行基因組狀態和轉錄模式相關性分析。全基因組擴增和全轉錄組的同時擴增可以克服DNA或RNA量少的限制，可對一個只含有少量細胞的樣本進行分析。簡單的反應設置，合理而簡單的處理步驟，處理時間只需20分鐘，完整的gDNA和RNA同時擴增總反應時間只有4小時，這使得REPLI-g Cell WGA & WTA Kit的操作步驟簡單和可靠。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit包含用于以下反應的試劑：

細胞裂解：在5分鐘內將樣本（含有25–1000個細胞）有效地裂解，同時保持RNA或DNA的完整性。裂解的細胞被分為相等體積的兩等份。一等份試樣用于WGA，而第二等份試樣用于總RNA的WTA，或富集mRNA（poly A +）RNA。
全基因組擴增：細胞裂解之后，一等份試樣中的DNA被修飾用于高效的連接反應。由于該連接反應的性質，DNA片段并未按照它們原本存在于生物體中的順序組裝。然而，這并不影響下游應用中的核酸序列檢測（例如，基因多態性），例如NGS、芯片分析或者qPCR。連接反應后，使用MDA技術和新穎的、高親和力REPLI-g SensiPhi DNA Polymerase進行擴增。
全轉錄本擴增：細胞裂解后，在開始WTA處理之前，gDNA被從第二等份試樣中去除，這是由于轉錄水平的精確測量依賴于能否消除gDNA污染所造成的假陽性結果。然后利用高效率的連接反應與擴增反應制備cDNA。根據隨后的逆轉錄反應過程中所選擇的底物，所有總RNA富集的轉錄物或只有poly A+ mRNA富集的多聚腺苷酸轉錄物將會被擴增。

應用

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit允許從一個非常小量的樣本開始對全部轉錄物和基因組進行均一的平行擴增。利用該試劑進行的gDNA和cDNA平行擴增非常適用于二代測序技術（包括DNA-Seq和RNA-Seq*）、芯片分析、基因分型檢測應用、或定量PCR。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kit適用于擴增：

轉錄組（RNA）: