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生物標志物的開發過程主要包括三個階段,即發現、驗證和確
認。隨著研究人員在發現階段積累了大量數據之后,需要對發
現階段得到的差異表達蛋白進行驗證和確認,從而推動生物標
志物的開發,這就需要對目標蛋白進行定量實驗。一般而言,
定量實驗包括相對定量和絕對定量兩個水平,相對定量可以進
一步驗證差異蛋白的表達變化,絕對定量可以確認目標蛋白的
絕對含量。這兩種定量實驗都需要在成分復雜的生物樣品中完
成,要求儀器必須具備高靈敏度高穩定性,以確保低豐度蛋白
的檢出和準確定量。
TSQ Altis是賽默飛世爾科技在2017年ASMS推出的全新一代
三重四極桿質譜儀,采用了增強型主動離子管控(Active Ion
Management,AIM+)技術優化從離子源至檢測器的離子傳
輸、消除主要噪聲源、精確隔離待測物,最終獲得了極限定量
性能。我們利用TSQ Altis 在復雜基質中針對目標蛋白和肽段分
別進行相對定量和絕對定量的定量驗證能力考察。其中,相對
定量所得的定量結果與前期發現階段用高分辨Orbitrap所得的
差異變化方向一致;絕對定量實驗中,目標肽段LOQ達到柱上
1.67amol,并實現4個數量級的線性范圍。