硬酯酸單甘酯是一種應用廣泛的食品乳化莉.在食品添加劑上具有很好的應用前景。單甘酯粗產品中的雙甘酯的乳化能力只有單甘酯的百分之一, 所以單甘酯產品質量的好壞,取決于單甘酯含量的高低。但對單甘酯的定量分析, 迄今為止, 國內未見有準確、快速有效的方法報道。傳統的做法是采用化學分析法,通過氧化α單甘酯的鄰位羥基, 來涮出單甘酯的含量。該方法對β位單甘酯就無能為力了,而β位單甘酯在單甘酯的合成中是必然存連盼, 因此,用化學方法來確定單甘酯的含量, 不但操作繁雜, 試劑消耗多,而且偏差大,需要尋求一種更為有效的分析方法,以適應單甘酯的生產和發展。針對單甘酯粗產品中一般含有甘油, 單甘酯、雙甘酯和三甘酯, 且它們的分子量之間的差別比較大,而凝膠色譜法可以用來分離不同大小分子量的物質 本文采用這一方法,實現了單甘酯的定量分析。
一.儀器和藥品
Waters 150C 液相色譜儀。
Water 740數據處理儀。
四氫呋喃:C.P.或A.R., 用鈉干燥,蒸餾備用。
氯 仿:A.R.廣州溶劑廠產品
丙 酮:A.R.廣州溶劑廠產品
粗單甘酯:90%以上,丹麥進口。
硅 膠:層析用60~200目,上海產。
硅膠薄板:自制。
二、單甘酯標準樣品的制備
要進行定量分析,首先得有標樣, 國內甚至國外都沒有單甘酯的標樣出售,我們能夠得到的最高含量的樣品是丹麥進口的,其含量只有90%上,通過摸索,我們應用硅膠柱層析法,從粗單甘酯中精制出高純度的單甘酯。
1.薄板條件的選擇
進行柱層析前,利用薄板層析米選擇柱層析的溶劑系統。經過試驗,由95%體積的氯仿和5%體積的丙酮組成的溶劑系統,能在硅膠薄板上將單甘酯、雙甘酯、三甘酯分開 。
2.柱層析分離收集單甘酯
以上面確定的溶熱系統作為洗脫劑,稱取硅膠100克, 用濕法填充于直徑2.2厘米的玻璃層析柱中,得一均勻的硅膠柱。在柱的上端加入3克用冼脫劑溶解的單甘酯(用長滴管均勻加入),流速控制于每秒三滴左右,用5O毫升小錐瓶收集冼出液, 每收集25毫升換一小錐瓶, 連續收集500毫升左右,然后.薄層板逐一檢驗.確定哪些小錐瓶中只各有單甘酯。實驗過程中,我們發現,在這樣的溶劑系統下,單甘酯的溶解度隨溫度變化很大,這為我們對樣品進抒魚結晶提出了條件。為確保得到高純度的單甘酯,我們對柱層析得到的單甘酯重結晶一次。純化前后的色譜圖對比。
我們對純化的樣品進行了必要的儀器分析(紅外光譜.核磁共振.元素分析),結果表明該樣品是很純的,可以作為標樣。
三、單甘酯的色譜分析
經過一系列的探索試驗,應用下面的實驗條件能將單甘酯混合物很好分離,其條件是色譜柱u-styragel 100A. u-styragel 1000A串聯
溫度:室溫
流速: l毫升/分鐘
溶劑:四氫呋喃
檢測器:RI(示差)
定量方式:外標法
用上面的條件,我們對一系列含量不同的單甘酯樣品進行定量。
四、結果與討論
應用GPC的方法,測出一系列單甘酯樣品的含量,并和化學分析方法的結果對比。
從中可以看出, 凝膠色譜法比化學法測出的單甘酯含量都來得高, 其主要原因正是由于化學法不能測出β位單甘酯的緣故, 造成結果偏低 從色譜圖我們可以看出,若需要,改變實驗條件,還有可能將三甘酯、雙甘酯進一步分離, 實現對雙甘酯、三甘酯的定量。綜合上面的工作,得出如下結論:
1.用硅膠層析柱可以從粗甘酯中分離出高純度的單甘酯, 從色譜囤可以看出, 得到的單甘酯沒有雜峰, 并且峰形對稱, 并經必要的儀器分析, 說明其純度是可信的, 可以作為標樣。
2.以凝膠色譜法定量分析單甘酯,實驗操作簡便、快速、靈敏, 重現性好。在本實驗條件下, 單甘酯與混合物中其它成份的分離效果是理想的, 可用于單甘酯的定量分析。
參考文獻
[1]Kanfman H.P., 《油脂、肥皂、涂料》73,38,1971。
[2]Berner G.J.,《色譜分析》64,388,1972。