藥物制備中酸水解乳果糖的分光光度法測定
本文介紹了一種利用簡單、準確的分光光度法來測定藥物制備中的乳果糖。該方法不使用酶，而通過乳果糖的酸水解，并且不干擾藥物制備中的賦形劑。
A simple,accurate spectroPhotometric procedure for the determination of lactulose in Pharmaceutical Preparanons is described. The method is based on acid hydrolysis of lactulose Without the use of enzymes and does not interfere With exclpients contained in the preparations．
乳果糖濃縮液U．S．P．(4-O-B-D-半乳吡喃糖基D-果糖)是一種糖溶液，其主要成分是乳果糖，還含有少量的乳糖和半乳糖，以及極少量的其他糖類和水[1]。乳果糖是由一個分子半乳糖和一個分子果糖組成的二糖，可通過乳糖在石灰水中發生差向異構作用而生成。乳糖也是一種二糖，由一個分子半乳糖和一個分子葡萄糖組成。商品化的乳果糖糖漿是淡黃色至深黃色、粘稠的甜味液體。乳果糖可溶于水，微溶于乙醇[2]。
乳果糖可應用于醫藥和食品工藝。它被用于嬰兒藥方，以及用于慢性便秘、門靜脈系統腦病和其他腸和肝臟系統紊亂的預防和治療[3]。牛奶在加熱過程中會產生乳果糖，因此國際奶制品聯合會和歐洲委員會把乳果糖含量作為一種分析參數來區分容器消毒奶和超高溫(UHT)奶[4]。臨床上，把服用不代謝糖后尿中乳果糖與甘露醇的比例用來衡量一些傳染性和營養性疾病的吸收不良和腸道滲透失調[5]。
乳果糖在各個領域中的重要應用說明在生物流體、制藥和奶制品中需要更簡單可靠的定量檢測方法。目前已報道的方法主要有以下幾種：酶水解后的分光光度測定[4]、能做流體分析的自動酶反應器[3]、酶制備電極[6]和酶電化學生物傳感器[7]。其他技術主要是色譜方法，如高效陰離子交換色譜法[5]、具有電化學檢測功能的HPLC法[8]以及氣-液色譜法[9，10]。上述方法都存在耗時長、應用困難和價格很高等缺點，并且大多數報道的分析方法僅應用于奶制品中乳果糖的分析。
本文介紹了一種簡單的分光光度法來測定藥物制備中的乳果糖。這種方法是基于乳果糖的酸水解，而不使用酶。它的準確度和精確度高，不干擾其他賦形劑，適于藥物制備。
1實驗部分
1.1儀器
吸光度是采用UV-1601型紫外可見分光光度儀和LIBROR EB420H型分析天平(Shimadzu，日本東京)進行測量的。溫度的影響通過恒溫水浴裝置(Thennosht，China National Machhery and Equipment，中國北京)來確定。
1.2化學藥品和試劑
所有藥品均為分析純：
(1)硫酸(6N)：將40．8mL濃硫酸用250mL蒸餾水稀釋后制得6N硫酸(Merck KGaA，Darmstadt，Germany)。
(2)乳果糖標準溶液：乳果糖標準儲備液(5000μg／mL)用蒸餾水配制。1000μg／mL和最終使用的500μg／mL乳果糖標準溶液均用蒸餾水稀釋儲備液后制備。
(3)乳果糖樣品溶液的制備：乳果糖樣品溶液(500μg／mL) 由Disec糖漿(Ubra p『ivate Ltd．，N．W．F．P， Pakistan)、Floralac糖漿(Platinum Pharmaceutical private Ltd.,Karachi,Pakistan)和Lilac糖漿 (GETZ Pharma private Ltd.,Karachi，Pakistan)溶于蒸餾水制得。
2實驗過程
校正曲線測定過程如下：在帶有玻璃塞的燒瓶中加入10ml的6N硫酸，然后加入乳果糖標準溶液(5?25μg／ml乳果糖)。將燒瓶放入沸水浴中加熱70min，待溶液冷卻后用蒸餾水稀釋至100mL。采用1cm石英池在波長284nm處測定吸光度。采用同樣的方法測定空白和藥物制備中的乳果糖。
為了驗證該方法的重復性，測定了乳果糖的回收率。將已知標樣加入到一個已測定的乳果糖樣品中。強化藥品中通常含有7．5?12．5μg／mL的標準品。
3結果與討論
測定乳果糖時，假定在藥物合成中該化合物是果糖的唯一來源，而果糖只能通過乳果糖的水解產生［2］(圖1)。二糖可通過酸水解的方法變成單糖。對乳糖來說，水解產生的單糖主要是葡萄糖和半乳糖，而乳果糖水解生成的是果糖和半乳糖[11］。乳果糖在加熱條件下與硫酸反應，水解成果糖和半乳糖，然后在分子內重組，生成一種具有紫外吸收的化合物。產物在284nm處具有最大吸收(圖2)，分光光度法測定乳果糖非常有用。在乳果糖的測定中，需要優化不同的參數。
3.1酸度對乳果糖水解的影響
硫酸濃度在1?6N范圍內，吸光度隨著硫酸濃度的增大而增大。當硫酸濃度超過6N時，吸光度不再變化。如圖3所示。其他一些無機酸的測試結果并不理想。在5?20mL范圍內研究了硫酸體積對吸光度的影響，結果表明在10?20mL范圍內都具有恒定的吸收值。因此，我們最終使用10mL 6N的硫酸用來催化乳果糖的水解(圖4)。
3.2加熱時間對乳果糖酸水解的影響
當水解溫度為100℃時，在30?90min內研究了水解時間對乳果糖的酸水解的影響，實驗結果見圖5。當加熱時間為70min時，水解產物濃度達到最大值。
3.3分析數據
在0.5-25μg／mL的質量濃度范圍內，乳果糖酸水解符合比爾定律(圖6)。水解產物的摩爾吸光度為5.3x104L／mol／1cm。0.5μg／mL乳果糖的標準偏差和吸光度的變化系數分別為0.05和5.37％，檢測限和定量限分別為0.156和0.5μg／mL。
3.4干擾物的影響
通過在10μg／mL乳果糖溶液中加入已知含量的乳糖，研究了乳糖對該方法測定乳果糖的影響。結果發現沒有明顯的干擾作用。
3.5回收率
強化藥物樣品中加入的標準藥物的回收率在101.8土5.9％和103.6土2.2％之間(表1)。
3.6在藥物制備中的應用
這種方法用于當地商品化藥物制備中乳果糖的測定，結果見表2。該方法測定的酸水解乳果糖的產品質量是可靠的。
4結論
本文中測定乳果糖的方法具有簡單、準確和重復性好的特點，在藥物制備中乳果糖的測定具有潛在的應用價值。該方法可以廣泛應用于藥物工業，也能經過簡單改進后用于其他領域中乳果糖的分析，例如奶制品工業。
參考文獻:
- USP-24NF-19．United States Pharmacopeial Convention Inc.,Rockville,MD,2000.
- The Science and Practice of Pharmacy,20th ed．Gennaro AR,ed．Easton,PA：Mack Publishing Co.,2000：1271．
- Mayer M,Genrich M,Kunnecke W,Bilitewski U．AnalChimActal996；324: 37-45．
- Damascene AA,BernardoBA，MarconiE，Paleschi G．AnalChimActa 2000；406：217-24．
- Bao Y,S1iva TMJ,Guerrant RL,Lima AAM,Fox JW J Chromatogr B 1996；685：105-12．
- Sekine Y.HallEAH．Biosens Bioelectronl998：13：995-1005．
- Moscone D,Bernardo RA,Amine E,Palleshi G．Analystl999；124：325-9．
- Wring SA,Terry A,Causon R,Jenner WN. J Parmaceut Biomed Anall998：16：1213-24．
- Martinez O,Julio A,Boza J, Romera JM,GilA．Clin Biotech l995：28：401-5．
- De Block J,Merchiers M,Rentergham RV,Moermants R. IntDairy J 1996土; 6：217-22．
- U.S.Patent aPPl 20020169344．Kind Code：Nov l4．2002．