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  • THE ETERNAL PATIENCE

    TripleTOF 5600 分析

    上一篇 / 下一篇  2010-07-07 08:49:43/ 個人分類:USE

    總體而言S家沒有F家能吹,但是技術資料到了Marketing的手里總歸會忘乎所以的飄飄然,所以我們還是試著還原一下。

    AB Sciex公司新型TripleTOF 5600質譜在ASMS首次亮相 可進行定性與定量分析

      2010年5月25日

      AB Sciex推出了一款新分析儀器,此儀器首次允許了蛋白組學的研究者在同一質譜平臺上對蛋白質進行定性與定量分析。

      這款儀器被叫做AB Sciex TripleTOF 5600,AB Sciex TripleTOF 5600于這周在鹽湖城召開的ASMS會議上展出,公司領導對它的發布已經興奮等候了好幾個月。

      在記者的一次采訪中,AB Sciex首席執行官Andy Boorn把AB Sciex TripleTOF 5600稱為在其職業生涯26年里的“最重要的產品發布”。

    是呀!原來的QTOF太慢了,雖然指標很不做,但是我們買了這么多年基本上做不了組學的通量研究,只能做LCMS,跑上幾百個蛋白,不如LTQ、4800之類的用得多。

      四個多月前,Danaher完成了對AB Sciex的收購,TripleTOF 5600的推出實際上代表了在新管理機構下的AB Sciex新公司的嶄新亮相,Andy Boorn補充說。先前,該公司是一個合資公司,合資雙方分別是生命科技應用生物系統公司(Life Technologies' Applied Biosystems)與MDS公司。

    質譜屬于老的高科技——大機器、高成本、工業基礎和實力、年頭又長——沒有基因賺錢,所以賣給丹納賀這種老的高科技公司比較適合,給安捷倫也行的,做基因的不大會要——這是個又大又笨重的高科技。

      TripleTOF 5600除可應用于蛋白質組學研究,還被設計成可用于寬廣范圍的生命科學的各種應用。

      據AB Sciex介紹,TripleTOF 5600同時具備三重四極桿質譜的定量能力和TOF質譜的高分辨、精確質量測定的定性能力。

    其實QTOF原本定位就是做研究的,為了對付orbitrap,這幾家公司才提升了QTOF的性能。做MRM還是三重比較好,而且便宜,5600太高端太貴了,不會比orbitrap便宜。

      “我們的目的是要在一臺儀器上真正地實現不同功能,并具有特殊的性能。”Boorn說。“這意味著,在保證高速、高靈敏度下,你現在可以同時做多反應監測(MRM)實驗,同時你可以獲得高分辨的全掃描譜圖,即從樣品獲得的每一個峰都是高分辨率的。”

      “它工作起來是如此之棒,以致于讓我們對自己手頭正在使用的三重四極桿質譜的命運有些擔心。” Mount Sinai醫院Samuel Lunenfeld研究所的Ontario蛋白質學方法研究中心主任Lorne Taylor,如是說。Lorne Taylor在這周ASMS會議上告訴記者說,他已經在TripleTOF 5600發布之前就使用了它。

      Taylor最后指出,當前,TripleTOF的靈敏度尚不能與他實驗室的三重四極桿質譜儀相媲美;但Taylor又說道,他們的研發團隊已經能夠獲取從TripleTOF生成的數據,并用于產生三重四極桿質譜的MRM實驗中。

    這個是大實話!

      對于蛋白質組學的研究來說,TripleTOF 5600的到來加快了蛋白質由百科全書式的蛋白目錄到目標物研究的轉變,從而解決一些特殊的生物學問題。從前,蛋白質組學的研究者在對蛋白質進行定性和定量分析時不得不用兩臺質譜,而如今在TripleTOF 5600一臺儀器上就可以同時進行定性與定量分析。

      “在某些情況下,TripleTOF 5600質譜平臺帶來的便利是絕對有必要的,因為研究者們缺少基金,且處于巨大的時間壓力下,他們面臨大量的樣品、大量的分析任務,他們沒有一點點奢侈的時間能游刃于兩種質譜平臺之間。” AB Sciex。 公司副總裁兼制藥與蛋白組學業務總經理Dave Hicks說。

      “質譜平臺工作流程的簡便性是至關重要的”,Taylor說,“AB Sciex一直致力于使非專家用戶也能玩兒轉非常復雜的技術。” “這個工作流程簡單得不能再簡單了。 …這是博士和碩士研究者們都能操控的機器。因此我們希望TripleTOF 5600將給予科研人員幫助。”

    Sciex不會自己左手打右手的,三重四極桿賺錢的總量比QTOF多多了,而且一個是30萬USD,一個是50萬USD,不是同一檔次的產品。所以要想做好,最好有5500+5600,加上UPLCx2,100萬USD一個平臺。

      Boorn補充說:“TripleTOF 5600試驗時做了兩個工作流程,而您只需要操作一個流程,甚至在某種意義上說您在以一種先驗的方式在操作。因為您確實可以這樣來考慮:在某種模式下使用這臺儀器(TripleTOF 5600),就好像為樣品拍了一張全景的指紋圖,并不需要在拍攝前決定樣品中什么是你覺得重要的;拍完后您還可以返回去查詢所有的數據組。”

      隨著超高效液相色譜用于蛋白質組學和其它生命科學的研究,TripleTOF 5600也將把這種分離技術與高分辨質譜聯用。“這在過去是不可能的,因為過去的質譜,生成這種高質量數據的速度達不到超高效液相色譜系統的要求。”Hicks說。

      TripleTOF 5600平臺的多樣性,來源于AB Sciex公司最近在其它平臺中使用的大量的新技術,以及全新的一些技術。TripleTOF 5600的高靈敏度,來源于AB Sciex公司于2008年底推出的5500三重四極桿質譜中研發的四極桿離子部件的技術。

    5500他們還是改進了很多,終于不用1995年的的卡了。。。所以算是與時俱進的。原來的analyst我是用不來的,我手快,總是把analyst點死了。

      與此同時,新產品還采用了100 Hz(每秒采集100張譜圖)的智能高速(SmartSpeed)采集系統,據AB Sciex介紹,它比其它高分辨質譜的采集速度快5倍之多(這個是指比安捷倫的URHTOF快5倍,比orbitrap快200倍)。并且簡易質量校準(EasyMass Accuracy)可達到1 ppm的質量準確度,而不需要用戶的連續校準。

      此外,該平臺融入了新型加速器飛行時間分析器(Accelerator TOF Analyzer)技術,可在高速、工業級的高靈敏度下獲得高分辨的數據。據Boorn,介紹,配備在質譜平臺的TOF系統是“令人吃驚的……尤其是考慮到四極桿區的離子離開了碰撞池后,如何去捕獲這些離子而不損失信號,并再次聚焦成離子束,以高速度、高精度的條件下進入飛行時間區。”

    AB SCIEX TripleTOF? 5600系統創立了新的性能水平,用于定性和定量分析的最快、最靈敏的高分辨質譜

      FOSTER CITY, Calif.——2010年5月24日,AB SCIEX,生命科學分析技術的全球領先者,今日宣布推出AB SCIEX TripleTOF? 5600系統,具有突破性的質譜技術——用于高性能定性和定量分析的最快、最靈敏的高分辨質譜。系統展示了質譜技術顯著的提高,第一次在一個平臺上,同時具有三重四極桿的典型定量能力,和高分辨、精確質量系統的定性能力。TripleTOF 5600系統為科學家們設計了新型、更好的方式來進行質譜實驗,應用在諸如新藥發現、生物標志物檢測、以及食品安全環境分析等廣闊范圍的生命科學應用中。AB SCIEX 在鹽湖城召開的第58屆美國質譜會議上首次展示了它的這套下一代的質譜系統。

      AB SCIEX TripleTOF 5600系統具有一系列的新的創新技術,包括:

    • 智能高速(SmartSpeed?)的100 Hz采集速度——至少是其它高分辨質譜5倍以上的速度;

    是否有用?關鍵看碰撞室的clean up時間是多少ms,還有就是各系統的同步,如果電磁閥一秒開100次就肯定不行。不過還是很快的,一般我們要求的是一秒鐘10個串級就可以了。

    • 加速器飛行時間分析器(Accelerator TOF? Analyzer)——在高速度和工業級的靈敏度下具有高分辨能力;
    • 簡便質量校準(EasyMass? Accuracy)——可獲得穩定的約1 ppm的質量準確度,卻不需要用戶持續的校準。
    • 相比于市場上現有的精確質量測定質譜,這些特性展示了顯著的技術進步,原先的系統在定性時需在速度和靈敏度之間取得平衡,在準確定量時又要在重現性和精密度之間取得平衡。

      TripleTOF 5600作為下一代的質譜儀器,是唯一的一套系統,同時具有最高可獲得的靈敏度、速度和高分辨率。科學家們能夠使用它,從樣品中獲取更高質量的信息,并且比從前所有可能的情況來得更容易,從而提高了實驗室的產率和效率。TripleTOF 5600系統也幫助生命科學工作者能夠在強大的新型工作流下工作,可對復雜樣品進行全面的探索、快速的篩選和高分辨的定量,這些性能是在其它類型的質譜中不可能獲得的。

      隨著新質譜系統的發布,AB SCIEX公司為支持這些工作流,還發布了一系列特色的應用軟件。比如:

    • 代謝物導航(MetabolitePilot?)軟件:用于在藥物研究中鑒定代謝物;
    • 峰觀測(PeakView?)軟件:用于快速和簡便地處理和顯示大量的質譜數據;
    • 多組分定量(MultiQuant?)軟件:用于簡化小分子和大分子的定量流程;
    • 蛋白導航(ProteinPilot?)軟件:用于簡化蛋白質組學研究;
    • 脂類觀測(LipidView?)軟件:用于脂質組學研究;
    • 標志物觀測(MarkerView?)軟件:用于代謝組學和生物標志物篩選分析。

      TripleTOF 5600系統,是AB SCIEX公司與位于多倫多的Mount Sinai醫院的Samuel Lunenfel研究所,以及Geneva大學質譜中心合作研發的。這些合作幫助開發了用于制藥和疾病研究的工作流,現在隨著新系統的推出,廣大的生命科學社區已可獲得該技術。

    hen,我就等你的數據,想當年一堆儀器在比組學性能,他原來的那個可是墊底的,和島津的差不多,例如,組學質量準確度竟然不是正態分布。我們已經有maxis的數據,UHR也馬上有了,就等5600的來。光會測標樣可是不行的。

      Andy Boorn,AB SCIEX公司的首席運營官(COO)

      “AB SCIEX TripleTOF 5600系統的推出,是一個最近的例證,來展示我們的創新能力、能夠領導突破性技術的能力,這些將指引質譜發展的方向。這套先進的解決方案,直接回應了客戶還未被滿足的追求更快、更準的需求,應對了在分析科學領域中的各種各樣的挑戰,我們非常自信,能讓我們遍布全球的客戶實驗室擁有革命性的發現能力。”

      Lorne Taylor,Mount Sinai醫院的Samuel Lunenfel研究所的Ontario蛋白質組學方法中心主任

      “AB SCIEX TripleTOF 5600系統,顯著增強了我們在生物醫學研究領域的質譜能力。我們正在使用這套系統,在最高的靈敏度水平上對蛋白和蛋白修飾進行同時的定性和定量分析,而在以前,我們需要兩套不同的儀器。TripleTOF 5600系統使我們可以快速地檢測到更寬范圍的蛋白質和多肽,比從前獲得更高質量的數據,從而升級我們的研究能力。這對于提升我們在揭示癌癥、糖尿病、心臟病機理的研究水平,是至關重要的。”

      Gerard Hopfgartner,Geneva大學質譜中心,博士、教授、科學家

      我們親身實踐了AB SCIEX TripleTOF 5600系統,這套系統為我們提供了關于生物系統的關鍵信息,這些是我們在其它方式下無法獲得的。儀器的高速度讓我們可在更短的時間里獲得更多的分析結果,并對復雜樣品觀測地更深入。因為我們能夠在一個樣品中鑒定和定量更多的物質,在這項技術之上我們開發了一種新策略,應用質譜來提高藥物研發的速度和水平。”

     

    關于AB SCIEX TripleTOF? 5600系統的進一步描述:

          AB SCIEX TripleTOF? 5600系統采用了新一代的四極桿飛行時間技術。發源于超一流的Triple Quad? 5500三重四極桿系統,新的加速器飛行時間分析器(AcceleratorTOF? Analyzer)被研制出來,在高速度、高靈敏度上增加了高分辨率,可以獲得與高端三重四極桿相當的CV偏差和定量限(LOQ)。

          制藥、科研和分析測試領域的科學家們現在是第一次,可在非常復雜的基質中,對低豐度的分析物獲得全面的定性探索、快速篩查和高分辨定量,而完成所有這些只需在TripleTOF? 5600這樣一套獨立的系統中。

    • 在無與倫比的高速下獲得高分辨:最高達到40,000 FWHM的分辨(累積10毫秒)

    連續的4萬是相對于Orbitrap的優勢,這個快的多,orbi上要1~2秒。加上靈敏度處于LTQ和Orbitrap之間,高速、高分辨、高靈敏度同時達到,這就是這批新的QTOF的賣點。

    • 簡潔質量校正EasyMass? Accuracy:不需要連續的重現校正,可在LC/MS條件下連續工作50個小時,并達到<2 ppm RMS的質量準確度
    • 智能高速SmartSpeed? 100 Hz采集:在高速液相條件下可獲得高分辨率,在1秒內可采集最多100張譜圖,或在1秒內采集50張譜圖并同時進行IDA采集(智能實時數據過濾)
    • 最靈敏的高分辨率系統:在高分辨系統中最低的定量限(LOQ),定量性能相當于高端三重四極桿。

     

      關于AB SCIEX

      AB SCIEX是生命科學分析技術研發的全球領先者,幫助科學家們應對復雜的科學挑戰。公司研發科學儀器、軟件和服務,用于新藥發現、先進的醫學科學,并保護食品和環境安全。AB SCIEX的技術解決方案,將最高的性能和最高的可靠性結合起來,加速客戶的科學發現,在高置信度水平上獲得結果并提高生活質量。公司具有20年的創新歷史,在先前的Applied Biosystems/MDS合資公司時期居于市場領導地位。欲了解更多關于AB SCIEX的信息,請訪問www.absciex.com

    最后:

    *** 5600 TriplTOF的彩頁

    總結一下5600的技術細節:
    -q b*k rnmi0分析測試百科網mcZ(cg.vjC-@l
    1、40GHzTDC,分辨力、速度、靈敏度上有優勢,做研究比較好,但是在動態范圍上應該不如安捷倫ADC的好;我估計是Sciex的快電子學做不過安捷倫。分析測試百科網'T![adVRb%X
    2、15kV加速電壓,這個很好,大離子容易檢測,也比較危險,跟人家的打拿極一樣了,外面的電線上幾年后都是吸的灰;分析測試百科網5Z[:o P)gp q/b
    3、oa+VR+二級網,這個改進了,不過沒有本質上的進步。分析測試百科網+`n+u9kJ+c
    4、MCP的輸出峰寬是250ps左右,這個比較有水平,我們只能做到700~900ps,一般的TOF只有2000ps左右。分析測試百科網trz4]~FqJ'S]
    5、30kHz的Pulser,這個說明最大飛行時間都在30us以內,比原先的減少了3~4倍,可以補償一些TDC帶來的動態范圍不足的問題。即使如此,5600的TOF圖上最大也就1.2e5cps,原先只有3e4cps,三重四極桿上有5e7吧,鮮明的對比呀。

    這個TDC應該比較貴,電子學上一大堆成本,我看只能用在超高端的研究級儀器上,一般的LCMS還得過上10年才能隨著電子技術的進步使用這些技術。

    以上是本人暑假閑著沒事干的作業。

     


    TAG:

    17級 引用 刪除 xhcb2007   /   2010-08-29 20:59:16
    牛人,求原貼~~

    原帖由hoggy于2010-08-13 10:22:22發表
    原帖由hoggy于2010-08-13 09:12:40發表
    引用 刪除 dragon   /   2010-08-12 23:44:30
    閑來無事, 看到中國
    徐好狗的高級玩具 引用 刪除 hoggy   /   2010-08-13 10:22:22
    原帖由hoggy于2010-08-13 09:12:40發表
    引用 刪除 dragon   /   2010-08-12 23:44:30
    閑來無事, 看到中國所謂的名校復旦的才子寫的貼子, 也對以上


    有關安捷倫的事情,我想做產業化的第一天,幾個公司里面的SS就給我說,“不要惹安捷倫”。刨去安捷倫中國買辦公司不說,HP系還是極端極端極端厲害的,我們唯一能做的就是“在大象轉過身之前做好專利體系”。
    徐好狗的高級玩具 引用 刪除 hoggy   /   2010-08-13 10:09:53
    原帖由hoggy于2010-08-13 09:12:40發表
    引用 刪除 dragon   /   2010-08-12 23:44:30
    閑來無事, 看到中國所謂的名校復旦的才子寫的貼子, 也對以上


    終于有砸場子的了!大哥我等了很久了!

    有關商業的事情我們和國外廠家有一定默契,互相不會詆毀的。有的儀器是欠錢了,不過有很多不好說的原因,所以現在也就不了了之了,雙方都沒說什么,后面還是有很多合作的。我們自己造的儀器么,TOF是沒產業化,也是有很多原因的,也是要國內的廠家要保持一個默契,互相不詆毀。我前面也在生氣的時候羅里羅嗦的寫過一些東西,后來又自己刪除了很多。大家可以看看前面的,隱隱約約的應該能感受到我憋著的一些話。之所以留下那些文字,是為了后面的商業化開發團隊有個經驗教訓可以借鑒,這樣才能更好的促進國產儀器的進步。實際上我還是挺努力做產業化的,一些亂七八糟的離子源、配件、小質譜目前一年也有千萬級的小零頭賺賺了,大頭的GCMS、LCMS我們7月份以后換了個商業模式在做,今年9月份上海慕尼黑的時候有個專用的環境質譜推出,11月南寧的時候看看是LCMS還是GCMS先出來。

    國家經費的問題,要小心點說話,領導還在位子上呢。我們實際上10年以來也就申請到了500萬吧,應該是比較少的,成果其實還蠻多的,除了磁質譜其他的目前都還行,所以效率還是很高的。領導們也很尷尬呀,他們要投項目,投錯了會很難收場,所以我們以后還是和上下多聯系聯系。

    引進技術方面,其實質譜這個圈子很小的,我們和ABSciex、Finnigan等廠家的核心成員很多本來就是同學、同事,還有很多是博后期間同一個老板。只是在中國做質譜是挺難的,同樣的技術在加拿大10年前就產業化了,在中國到現在還沒折騰完。不過中國市場大呀,所以也就半工半讀的撐到現在。唉,實在混不下去了我們還是可以給老外干活的。關于俄國人,呃,TOF、QTOF、Orbitrap、Sector都是俄-德系的人發明的,他們數學真的比中國人還要好,而且很重要的一點是這伙人很悶騷,沉得住氣。我想我們也的悶騷一點啊,從基本的數學開始一直到售后,還是多點漲內功。
    徐好狗的高級玩具 引用 刪除 hoggy   /   2010-08-13 09:12:40
    引用 刪除 dragon   /   2010-08-12 23:44:30
    閑來無事, 看到中國所謂的名校復旦的才子寫的貼子, 也對以上樓主所述回復一下:
    1.        復旦的QTOF 雖說是買的, 可是據說錢卻欠了AB Sciex 50萬USD一直不付, 說好等老板做出些東東,從國家863抑或從南方基因組中分杯羹, 結果很多年過去了還沒弄到銀子, 這樣一來就上了人家公司的黑名單. 關系自然也很僵了. *********************************************************************************. 大家都知道怎么回事兒…
    2.        在國內很多場合, 都聽復旦的這些人說在做我們中國自己的質譜, 可是十幾年多過去了, 你們做出的東西又出現在哪個地方呢? 不過是發揮中國山寨板的風格和傳統, 把Analyst 解開原代碼來控制你們的ESI-TOF, 當然就容易死機不好用了. 或者讓俄羅斯幫著做, 大家評評理, 俄羅斯是做質譜的料嗎? 好待也要去學學島津, 到曼徹斯特這種有質譜研究底蘊的地方去搞些合作呀.
    3.        很明顯看出這個作者在幫安捷倫說話, 但是為什么你們哪里沒有安捷倫的儀器呢? 如果站在中國儀器制造業的前沿陣地, 卻把國外最新最好的東西說成是高級玩具, 而把這個做小液相出身, 或再早做信號發生源起家的, 進入質譜領域才短短幾年, 卻把市場營銷做為自己看家本領的安捷倫公司說成是無與倫比的高端儀器制造商, 真是大錯而特錯; 這可以說是我們中國儀器制造業的悲哀和大不幸, 因為之所以中國神五神六都上天了, 而質譜卻只有東西電子開始商業化, 就是因為國家的開發儀器的資金都流入了這些學術騙子的手里, 而不是真正到了最需要它們的地方. 國家每年多少的外匯都給了這些國外的儀器公司啊, 觸目驚心啊!!!
    4.        用中傷的方式而不用科學的數據, 有背于一個科研工作者的道德操守. 自己了解一點點皮毛就喜歡拿出來在外行面前炫耀賣弄, 有過于輕浮的嫌疑. 我們中國用戶有幾個能有國家的資本和金錢去自己造質譜呢?  而筆者前后所說又矛盾不一, 先說”估計”SCIEX快電子做不過安解倫(拜托, 憑什么你就能估計人家兩個大公司的技術呢?), 再說SCIEX 電子學上成本一大堆, 只能用在超高端的研究級別儀器(但人家就是商業化了, 你復旦再過20年也沒法商業話. ) 我看筆者大學放暑假確是需要好好休息, 放松心身, 否則在實驗室里要么是被憋傻了, 要么是被熱瘋了…
    徐好狗的高級玩具 引用 刪除 hoggy   /   2010-08-04 07:13:40
    千萬別被廠家的宣傳蒙了,他們說10sp/s的時候,我們實際要達到可以檢索的譜圖質量,在老的SCIEXQTOF上要2s,在65xx上要1s。其他質譜,也是差不多的,沒有辦法用在極限參數上,需要實際使用的時候調。

    現在新的QTOF的趨勢是高壓,像MALDITOF的電壓一樣,高速比原來快10倍,當然這也意味著高成本。

    TOF的問題是,這個玩意兒IP保護的比較差,哪一家公司都能做,相當于Open Source的,所以Finnigan是絕對不會做的。要不是F有Orbitrap,其他家也不會重點發展TOF的。現在局面就是各家用新TOF打Orbitrap老狗。
    pcs 引用 刪除 pcs   /   2010-08-03 14:03:41
    樓主說高通量蛋白質組學要求1s內1個MS帶10個串級,這個速度要求現在的TOF基本都能滿足,10Hz,20Hz,50Hz采集速度的Q-TOF現在也不少。但對于TOF,高速采集意味著每張圖譜累加的次數或時間減少,因而圖譜質量嚴重下降。對于高濃度標準品影響不大,對于實際樣品的鑒定問題多多了。所以100Hz的采集速度,究竟還有多少意義呢?
    pcs 引用 刪除 pcs   /   2010-08-03 13:53:50
    從其彩頁上上看,累加時間10 ms 到1s的質譜圖,信號強度卻沒有任何變化,這很不好理解啊。樓主有什么見解?
    徐好狗的高級玩具 引用 刪除 hoggy   /   2010-07-13 08:39:56
    TripleTOF 5600的主頁做的很燒錢!
    http://www.absciex.com/tripletof
    老徐SIR 引用 刪除 老徐SIR   /   2010-07-10 14:11:57
    很好,比較真實的評價。
    reedzsu 引用 刪除 reedzsu   /   2010-07-09 14:40:25
    樓主果然是做TOF的高手。不過5600的性能確實令人驚訝,應該SCIEX加了一些TOF/TOF的技術在里面,否則TOF很難做到這么快的。
    bergkamp88 引用 刪除 bergkamp88   /   2010-07-09 13:59:30
    5
    michael_b_rex 引用 刪除 michael_b_rex   /   2010-07-09 08:36:17
    十分感謝您的分享。學習下。
    考研吧 引用 刪除 考研吧   /   2010-07-09 08:34:54
    樓主的知識實在博大,學習了  
    358uwcj 引用 刪除 358uwcj   /   2010-07-09 08:34:17
    感謝分享!向牛人致敬!
    yyid 引用 刪除 yyid   /   2010-07-09 08:32:08
    新知識,學習有益!!!
    dragon5 引用 刪除 dragon5   /   2010-07-09 08:29:57
    總結的很好,可能許多人都不注意這些細節
    Hands on the Quadrupole 引用 刪除 yong.chen.gss   /   2010-07-08 18:38:57
    絕對專業用心的評論
    Hands on the Quadrupole 引用 刪除 yong.chen.gss   /   2010-07-08 18:38:38
    5
     

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