一、保健食品中脂溶性維生素分析方法概況
保健食品中添加有維生素A、維生素D、維生素E、維生素K和b-胡蘿卜素，一般情況下后兩者使用相對較少
。鑒于脂溶性維生素的特點和樣品基質情況，樣品一般需要在皂化后經有機溶劑提取后測定。
1.維生素A
一般添加視黃醇醋酸酯和視黃醇棕櫚酸酯兩者之一或兩種均添加。通常情況下成分復雜的樣品需采用皂化反應后測定其中的視黃醇。成分相對簡單的片劑和膠囊樣品可采用溶劑提取直接測定視黃醇醋酸酯或視黃醇棕櫚酸酯。奶粉等產品可以使用胰酶或蛋白酶處理，溶劑提取后測定視黃醇醋酸酯或視黃醇棕櫚酸酯。
2.維生素E
一般情況下添加的是a-維生素E。成分相對簡單的樣品可采用溶劑提取直接測定。多數樣品需要在皂化反應后測定其中的維生素E。
同時分析維生素E 4種結構并包括內標物，可使用如下正相柱：
(1)Nucleosil-NH2 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二惡烷=85：15，295nm
(2)Zorbax SIL 4.6×250mm,
5μm，正己烷：二惡烷：異丙醇=985：10：5，295nm
(3) Lichrosorb-NH2 4.0×250mm，5μm，正己烷：異丙醇=99：1，295nm
(4) YMC-Pac A-600 (NH2)，3μm，正己烷：異丙醇=98：2 Ex：290nm
Em：325nm
3.維生素D
一般情況下添加的是維生素D2和維生素D3中之一。目前維生素D的分析尚不如維生素A和維生素E成熟，主要原因為含量低，前處理過程損失多，與維生素E較難分離。現在采取的方法是采用乙腈+甲醇+水=25+75+4作為流動相，根據樣品中維生素D的情況，選擇維生素D2和維生素D3互為內標。維生素D的分析對于色譜柱的要求較高，一般來講
250mm長度的Zobax SB-C18 比較適合分析要求。
4.b-胡蘿卜素
b-胡蘿卜素一般出現在植物性保健食品中，分析方法相對成熟。目前我們將維生素E、番茄紅素和b-胡蘿卜素通過采用不同的波長達到一次性分析的目的。樣品采用二氯甲烷進行提取，分析過程需要加入抗氧化劑BHT對組分進行保護。
流動相為甲醇：乙腈=50：50
色譜柱：Supelcosil RP C18
5.α-胡蘿卜素
α-胡蘿卜素目前也出現在保健食品中已有應用，初步將其與b-胡蘿卜素一同分析。樣品采用丙酮進行提取。
流動相為甲醇：甲基叔丁基醚：水=310：76：14
色譜柱：Symmetry C18
檢測波長：450nm
二.保健食品中水溶性維生素分析方法概況
目前建立并推廣了一套的系統分析方法，通過選用多波長離子對高效液相色譜分析可以解決維生素B1、維生素B6、煙酸、煙酰胺、維生素C的分析。生物素、泛酸、葉酸需采用單獨的高效液相色譜分析條件。維生素B2采用熒光分光光度法分析。
1.維生素B1(鹽酸硫胺、硝酸硫胺)
分析維生素B1可采用鹽酸苯海拉明作為內標。樣品采用甲醇+水+磷酸提取。
流動相為硫酸月桂酯鈉溶液(5g/530mL)：乙腈：磷酸=530：470：0.4
色譜柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18
檢測波長：260nm
2.維生素B1(呋喃硫胺)
有報道，呋喃硫胺是維生素B1的活性結構，在韓國、日本等產品中使用
呋喃硫胺與鹽酸硫胺、硝酸硫胺的色譜行為有較大區別。
流動相為甲醇：水：乙酸：PigB6=450：530：20：20
色譜柱：m-Bondapak C18
檢測波長：280nm
3.維生素B6(吡哆醇)、煙酸、煙酰胺
分析維生素B6、煙酸、煙酰胺可采用愈創木酚甘油醚作為內標。樣品采用甲醇+水+磷酸提取。
流動相為1-癸烷磺酸鈉溶液(1.22g/850mL)：乙腈：磷酸=850：150：0.4
色譜柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18
在維生素類保健食品中煙酸應用極少，基本上添加的均為煙酰胺。
檢測波長：280nm
功能性飲料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同時檢測。根據大量實驗認為液體類樣品應使用TSK
Gel-C18，固體樣品兩者皆可。
4.維生素C
除顏色較深、含量較低、天然植物干制品外，一般樣品中的維生素C均可以采用碘溶液滴定法進行測定。利用高效液相色譜法測定維生素C可利用維生素B6(吡哆醇)、煙酸、煙酰胺流動相體系，因維生素C色譜保留時間較短，可以將降低其中乙腈的比例至5%。提取溶劑盡可能使用水，以避免在前面出現倒峰影響定量結果的準確。
檢測波長：254nm
5.維生素B2
有關維生素B2的色譜分析方法有報道，但在實際樣品分析過程中因保留時間較短且與其它峰難以較好分離，故采用將其轉化為光黃素后進行熒光分光光度法分析。
6.泛酸(維生素B3)
泛酸采用液相色譜分析法進行檢測，樣品用水提取即可。
流動相：0.02M磷酸二氫鉀溶液：乙腈=95：5，pH=3.0
色譜柱： m- Bondapak C18 300mm
檢測波長：200nm
7.生物素
生物素的分析正在初步摸索階段，目前采用pH=3.5 0.25M磷酸鹽緩沖溶液：甲醇=77：23的流動相，檢測波長200nm。
目前的需要解決的問題是保留時間較長，大約在30min左右;此外靈敏度較低。
8.葉酸
葉酸一般使用弱堿性水溶液提取，為保證提取效果可以在50℃水浴中加熱 10min。
流動相：磷酸二氫鉀緩沖溶液：甲醇=460:40，pH=6.0
色譜柱： m- Bondapak C18 300mm
檢測波長：280nm
葉酸的研究方向：通過大量實際樣品檢測研究，發現在蟲草等天然產物中存在與葉酸色譜保留時間完全一致的物質;不少樣品中葉酸含量較低，擬采用固相萃取等技術作為前處理手段。
9.維生素 B12
維生素B12的化學分析目前還是一個難題，對于含量較高，組成簡單的原料和添加劑進行高效液相色笱單的原料和添加劑進行高效液相色失雜的多種維生素樣品的分析方法正在摸索之中。
維生素B12的研究進展：雖然維生素B12有3個特征波長，但樣品在不經處理的情況下也很難分析;在溶液中鈷胺素很容易出現氰鈷胺素、甲鈷胺素、羥鈷胺素等幾種形式共存的現象。為避免出現上述問題，更好地去除樣品中的干擾雜質并對樣品中的維生素
B12進行富集，目前采用加入表面活性物質、鹽析、有機溶劑萃取等方法去除雜質，再通過固相萃取法進行富集的手段。
三、類維生素分析方法概況
1.肉堿(維生素BT)
肉堿若采用分光光度法檢測比較繁雜，高效液相色譜法測定相對簡單。利用高效液相色譜法測定肉堿同樣利用維生素B6(吡哆醇)、煙酸、煙酰胺流動相體系，因肉堿色譜保留時間雖比維生素C長但相對仍較短，因此流動相可以同維生素C一樣。提取溶劑盡可能使用水或pH=5～6的水，以避免在前面出現倒峰影響定量結果的準確。
檢測波長：210nm
2.輔酶Q10
對于維生素類樣品中輔酶Q10的檢測采用液相色譜分析法。樣品中輔酶Q10使用正己烷作為提取溶劑。
色譜柱：TSK Gel-C18
流動相：乙腈+四氫呋喃+水=55+40+5
檢測波長：280nm
3.肌醇
對于維生素類樣品中肌醇的檢測建立了一套衍生化-氣相色譜分析法。樣品中肌醇經過提取，徹底去除水分后進行衍生化，正己烷提取后進行氣相色譜分析。
衍生化試劑：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8
色譜柱：BP-5彈性石英毛細管柱, 25m×0.32mm
色譜條件：載氣 50mL/min
尾吹氣 50 mL/min
氫氣 40 mL/min
空氣 500 mL/min
分流比 1：50
四、需要解決的問題及展望
1.解決樣品前處理技術
(1)不少油性膠囊樣品中加入了水溶性維生素，如何應用前處理手段解決提取、凈化問題。
(2)對于含量較低的樣品如何應用固相萃取等手段。
(3)對于目前原料微囊化制作技術如何應對。
2.解決色譜多組分分析技術
在目前現有的多組分分析技術的基礎上，如何能將維生素B1并入維生素B6系列之中或創建新的流動相體系，再囊括維生素B2和葉酸等是今后研究的重要方面。
3. 解決分析過程快速化
在目前大量樣品檢測的基礎上應歸納總結出樣品前處理方法指南，確定樣品組成和前處理方法之間的關系。
